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Adiponectin基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立

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任维华[1,2] 李西华[1,2] 王芳[1] 乔建瓯[2,3] 党素英[1,2] 孔辉[2] 王龙[2,4] 陆顺元[4] 孙霞[2] 徐国江[2] 傅继梁[2] 费俭[2] 王铸钢[1,2,4]

[1]上海交通大学医学院医学遗传学教研室,上海200025 [2]上海南方模式生物研究中心,上海201203 [3]上海交通大学医学院附属瑞金医院内分泌科,上海200025 [4]上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室,上海200025

《生物化学与生物物理进展》

2006年第33卷第9期

摘　　要:

adiponectin是脂肪细胞特异分泌的一种活性蛋白质，具有增加胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等活性．建立adiponectin基因剔除13．半乳糖苷酶基因（LacZ）敲入小鼠模型，可为整体动物水平研究adiponectin基因功能及其表达调控机制等提供理想工具．根据生物信息学方法获得adiponectin基因组序列，设计基因剔除及敲入策略，在adiponectin基因第2和第3号外显子剔除的同时，在其ATG和信号肽序列后顺接LacZ基因完整编码序列，构建完成了Adipo-LacZ-XpPNT基因剔除质粒．通过电穿孔将打靶质粒转入ES细胞，以G418和ganciclovir进行药物筛选，获得药物抗性的ES细胞克隆，PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组克隆．将同源重组的ES细胞克隆注入小鼠囊胚得到嵌合体小鼠，嵌合体小鼠与C57BL／6J小鼠交配产生杂合子小鼠，杂合子间交配获得adiponectin基因剔除LacZ基因敲入纯合子小鼠．经RT．PCR、RNA印迹和ELISA检测证实纯合子小鼠脂肪和血清中adiponectin基因表达呈阴性．RT-PCR、RNA印迹及蛋白质印迹检测发现，LacZ基因在突变小鼠脂肪组织中有特异性表达，其表达谱与内源性adiponecfin基因的表达谱一致．但在脂肪组织及外周血中未能检测到LacZ活性，且血清中LacZ蛋白亦呈阴性．由此成功建立了adiponectin基因完全灭活及LacZ基因以内源性adiponectin基因表达谱表达的小鼠模型，为进一步研究该基因功能及其表达调控创造了有利条件． (共8页)