siRNA抑制HIV-1基因表达的研究

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摘　　要:

RNA干扰（RNA interfering，RNAi）现象是动植物体内的一种序列特异性的、转录后基因沉默的过程．在哺乳动物细胞中，19425个核苷酸长短的双链siRNA（small interfering RNA）可有效地抑制基因表达．利用pBS／H1SP载体，它表达的双链RNA的转录产物可以用来抑制特异性HIV-1基因的表达．在siRNA实验中，为了比较由H1启动子转录的siRNA在细胞内的作用，使用以绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因的载体——pEGFP—C1质粒，在荧光显微镜下，很容易地看到EGFP在细胞中表达．将HIV-1 siRNA表达载体与表达相应EGFP-HIV融合基因的质粒，共转染人胚肾293细胞，结果表明，和对照质控载体相比，转染了pHIV—siRNA质粒的细胞中EGFP—HIV的表达得到显著抑制．通过该途径，筛选出能抑制HIV-1基因表达的有效siRNA．此外，还在同一载体上表达两种或三种siRNA，分别针对不同的HIV基因，获得了良好的抑制效果．