造血干细胞相关microRNAs的筛选及其促分化研究

孙建国[1] 廖荣霞[2] 张亮[3] 娄桂予[2] 周度金[2] 陈正堂[1]

[1]第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所,重庆400037 [2]第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆400038 [3]北京博奥生物芯片技术有限公司,北京102206

摘  要:

为了获得人脐血造血干细胞(HSCs)的microRNAs(miRNAs)表达谱,并对相关miRNAs功能进行初步鉴定.利用免疫磁珠(MACS)和流式细胞仪(FACS)细胞分选技术分离人脐血造血干细胞(HSCs),分别提取细胞总RNA并分离小分子RNA,经荧光标记后与miRNAs基因芯片杂交,获得HSCs的miRNAs表达谱,集落形成实验(CFC)研究在HSC中高表达miR-520h对HSC的促分化作用.成功分离人脐血CD34+细胞和HSC,经基因芯片杂交获得31个造血干细胞相关miRNAs,其中22个为低表达,9个为高表达;经实时定量RT-PCR验证miR-520h显著升高,CFC实验表明其可增加多种集落形成,具有促进HSC向祖细胞分化的作用.上述结果表明,人脐血HSC具有自身特征性miRNAs,参与并调控HSC生物学功能,为深入探讨miRNAs在造血系统发育中的作用打下基础. (共7页)

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