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含短C肽人胰岛素原类似物DesB^30在毕赤酵母中的表达及纯化

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高剑坤[1] 蔡绍皙[1] 范开[2,3] 冯强[3] 陈海蓉[3] 张益[3] 胡伟[3] 杨应彬[1]

[1]重庆大学生物工程学院,重庆400044 [2]重庆工学院,重庆400050 [3]重庆富进生物医药公司,重庆400041

《生物化学与生物物理进展》

2008年第35卷第1期

摘　　要:

合成含短C肽AAK,并去掉B链第30位苏氨酸（T）的人胰岛素原类似物：HMPIDesB^30（human mini-proinsulin des B30）的cDNA,将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒pPIC9K.用电转移的方法将重组质粒HMPIDesB^30/pPIC9K转入甲醇酵母GS115.用含不同G418浓度的YPD平板筛选高拷贝重组子.经优化条件下的高密度发酵,发酵液用SIPI-40大孔树脂吸附,大孔吸附树脂洗脱液经SP柱进一步纯化后,再用10～20mmol/L Zn^2＋沉淀,能得到纯度为95%的HMPIDesB^30.通过16.5%Tricine SDS-PAGE、HPLC和质谱分析,表达产物分子质量与理论分子质量相符,经高密度发酵,表达量可达1.0g/L.纯化回收率可达60%.说明人胰岛素原类似物HMPIDesB^30能在甲醇酵母中高效分泌表达,并能通过经济有效的方法纯化. (共6页)