摘 要:
采用基因质粒转染技术、荧光发射谱检测分析以及荧光共振能量转移（FRET）受体光漂白技术,首次在活细胞中实时检测中药蟾酥（Chan-Su,CS或bufonis venenum）诱导人肺腺癌（ASTC-a-1）细胞凋亡过程中caspase-3的活化特性.采用CCK-8（Cell Couneing Kit-8）技术检测发现,蟾酥对细胞的活性具有显著的抑制作用;蟾酥处理稳定表达FRET质粒SCAT3的人肺腺癌细胞后,在不同的时间检测活细胞中SCAT3的荧光光谱;利用共聚焦扫描荧光显微成像技术检测蟾酥处理后细胞的形态,从而进一步证实蟾酥诱导细胞凋亡.实验结果表明：a.蟾酥可以有效抑制人肺腺癌（ASTC-a-1）细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡.蟾酥对细胞的抑制作用具有剂量依赖性;b.蟾酥处理细胞6h后能检测到明显的细胞凋亡小体,连续作用24h后细胞全部皱褶,并有部分细胞破碎;c.蟾酥作用细胞2h就能明显切割细胞内的SCAT3,细胞内SCAT3的切割程度随着蟾酥作用时间的延长而增加,24h内细胞内的SCAT3完全被切割.受体光漂白实验也证实了该结论,表明caspase-3参与调控了蟾酥诱导的细胞凋亡过程.
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