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穗花杉ISSR引物反应条件的优化与筛选

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朱柏芳[1,2] 朱笃[1] 邓荣根[1] 李思光[2]

[1]江西师范大学生命科学学院／江西省亚热带植物资源保护与利用重点实验室,南昌330027 [2]南昌大学生物工程系,南昌330047

《植物研究》

2006年第26卷第3期

摘　　要:

在研究穗花杉（Amentotaxus aragotaenia）的遗传多样性过程中，为了获得清晰、重复性好ISSR扩增结果，对影响ISSR-PCR的多个因素包括模板浓度、Taq酶的选择和用量、Mg^2＋和dNTPs浓度及退火温度等指标等进行了筛选和优化，确定了穗花杉ISSRPCR分析的最适扩增条件：20μL PCR反应体系中，2μL 10×Taq酶配套缓冲液，1．8UTaq聚合酶（上海生工公司），0．2μmol·L^-1引物，0．18mmol·L^-1 dNTP，1．5～2．5mmol·L^-1 MgCl2，10ng·μL^-1模板DNA。用来自不同居群7个个体，以100个ISSR引物进行PCR扩增，筛选出扩增效果较好的10个引物。得到了92个位点，其中45个多态性位点，多态性位点比例为49％。 (共5页)