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传染性法氏囊病病毒非结构蛋白VP5的原核表达及多克隆抗体的制备

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张宁[1,2] 高宏雷[1] 高玉龙[1] 李俊山[1] 冉多良[2] 王笑梅[1]

[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室,哈尔滨150001 [2]新疆农业大学,乌鲁木齐830052

《中国生物工程杂志》

2006年第26卷第10期

摘　　要:

利用PCR技术，从传染性法氏囊病病毒（IBDV）Gx、Gt毒株中分别扩增出VP5基因，将其克隆到表达载体pET30a、pET28a中。经PCR、酶切和序列分析鉴定获得重组质粒命名为pET28a-GtVP5、pET30a-GxVP5。将pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主茵BL21（DE3），在IPTG诱导下成功表达了约24kDa的Gx-VP5及23kDa的Gt-VP5融合蛋白，它们都以包涵体形式存在。将Gx-VP5纯化后的蛋白免疫8周龄BALB／c雌鼠，ELISA分析表明制备的抗血清效价在1：25600以上，Western blot分析VP5表达产物能与抗6×His mAb及抗IBDV多克隆抗血清发生反应，具有良好的免疫反应特异性。