猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP2的原核表达及其单克隆抗体的制备

王海燕 姜平 杜以军 李玉峰 李军星 沈芳

南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京210095

摘  要:

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株截短修饰的NSP2蛋白基因(tNSP2),克隆于pGEX-6P-1载体中,转化大肠杆菌后用IPTG诱导表达。Western blot结果表明,融合表达的GsT—tNSP2蛋白能被PRRSV阳性血清特异性识别,大小约50kDa。经GsT柱提取纯化蛋白GST—tNSP2,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,获得2株能稳定分泌抗NSP2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,将其命名为285、3H3,亚型鉴定结果均为IgGl型,其轻链均为K链。间接免疫荧光试验证明,285和3tt3均能与PRRSVS1毒株产生特异性反应,而不能与SY0608毒株反应,从而为PRRSV分离株的鉴定及NSP2功能研究奠定了重要基础。

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