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半定量RT—PCR法检测原代培养脂肪细胞生脂基因mRNA转录表达
卢建雄 臧荣鑫 潘和平 杨具田 陈粉粉 杨公社 西北民族大学生命科学与工程学院 甘肃兰州730030 西北农林科技大学动物脂肪沉积和肌肉发育实验室
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摘要：在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中，为了检测生脂基因ACCI和FAS mRNA表达水平变化，细胞总RNA经反特录合成cDNA，以β-actin为内参照，分别与ACCI和FAS等基因同管扩增。通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数，以及引物时间的扩增竞争，建立了检测脂肪细胞生脂相关基因mRNA表达的半定量多重RT-PCR体系。结果显示，RT-PCR产物经电泳后，β-actin及生膳基因电泳带清晰，与预期产物大小一致，引物时间无扩增竞争，其扩增效率和特异性与单重RT-PCR体系相同，实验重复性好。因此，该方法和体系可用于快速、灵敏、可靠地检测特异基因mRNA的表达。 | |
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| 格式：PDF 页数：3 页 页码范围：16-18页 | ||
学科分类：
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| 关 键 词：原代培养脂肪细胞 生脂基因 半定量RT—PCR | ||
| 来源期刊：《中兽医医药杂志》2005年 第6期 | ||
| 收录数据库：中文科技期刊数据库 | ||
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