摘 要:
在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中，为了检测生脂基因ACCI和FAS mRNA表达水平变化，细胞总RNA经反特录合成cDNA，以β-actin为内参照，分别与ACCI和FAS等基因同管扩增。通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数，以及引物时间的扩增竞争，建立了检测脂肪细胞生脂相关基因mRNA表达的半定量多重RT-PCR体系。结果显示，RT-PCR产物经电泳后，β-actin及生膳基因电泳带清晰，与预期产物大小一致，引物时间无扩增竞争，其扩增效率和特异性与单重RT-PCR体系相同，实验重复性好。因此，该方法和体系可用于快速、灵敏、可靠地检测特异基因mRNA的表达。
