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在大肠杆菌中融合表达重组羧肽酶抑制剂

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许大洲[1] 王树英[2] 金坚[1] 李华钟[1,3]

[1]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214036 [2]江南大学分析测试中心,江苏无锡214036 [3]江南大学医学系,江苏无锡214063

《食品与生物技术学报》

2006年第25卷第6期

摘　　要:

利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂（carboxypeptidase inhibitor from potato，CPI）活性多肽基因，克隆于表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中，得到重组质粒pGCPI，测序后将重组质粒转化到受体菌Escherichia coli BL21中。重组菌经IPTG诱导表迭，超声波破菌后，通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白，纯度大于979，6。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽-S-转移酶后得到纯度大于98％的重组CPI，ELISA鉴定产物具有免疫原性，体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。 (共5页)