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红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立

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杨志玲[1] 冯刚利[1,2] 谭梓峰[1] 栾启福[1] 王承南[2]

[1]中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳311400 [2]中南林学院资源与环境学院,湖南长沙410004

《林业科学研究》

2006年第19卷第4期

摘　　要:

以红花石蒜叶片基因组DNA为模板，分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg^2＋的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响。建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序：即25μL反应体系中，有20ng模板DNA、0.5μmol·L^-1随机引物、150μmol·L^-1 dNTPs、2．0mmol·L^-1 Mg^2＋、1．0U Taq DNA聚合酶。反应程序为：94℃预变性5min；然后45个循环：每个循环94℃变性45s，55℃退火60s，72℃延伸2min；循环结束后72℃延伸7min。 (共4页)