畜牧兽医 >> 黑龙江畜牧兽医 >> 2006年8期 >> 摘要

牛干扰素-γ基因的RT-PCR扩增、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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李明峰[1] 孙宏鑫[1] 李凤华[2] 段丽娟[2] 任恩俊[2] 庄国宏[2] 江国托[1]

[1]大连轻工业学院食品科学工程学院,辽宁大连116034 [2]大连三仪生物工程研究所,辽宁大连116036

《黑龙江畜牧兽医》

2006年第8期

摘　　要:

根据GenBank上发表的牛干扰素-γ基因序列设计引物，从牛外周血淋巴细胞中提取基因组RNA，采用RT-PCR技术，扩增出干扰素-γ基因并进行序列分析。琼脂糖凝胶电泳显示牛干扰素γ扩增片段约为500bp。序列分析结果表明，牛干扰素γ基因序列全长517bp，开放阅读框架内501个核苷酸，共编码166个氨基酸，分子质量19．4ku，与参考序列完全一致。克隆序列经BamH Ⅰ／EcoRⅠ双酶切后连接到经同样双酶切的PBV220质粒中，转化入大肠杆菌DH5α中，筛选阳性克隆进行温度诱导表达，经SDS-PAGE分析，在约19．4ku处有表达的蛋白带，表达产物经免疫荧光染色鉴定为阳性。 (共4页)