香樟ISSR-PCR反应体系的正交优化

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冯杰[1,2] 陈香波[2] 李毅[1] 张德顺[2]

[1]甘肃农业大学林学院,甘肃兰州730070 [2]上海市园林科学研究所,上海200232

摘　　要:

应用L9（34）正交表建立了适合于樟树ISSR-PCR的优化反应体系,即20μL ISSR反应体系中含有1×PCR buffer、dNTP0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L、Mg2＋2.0 mmol/L、Taq酶1 U和模板DNA50 ng.适宜的扩增条件为：94℃预变性4 min;94℃变性40 s,58℃退火1 min,72℃延伸2 min,42个循环;72℃延伸10 min;4℃保存.

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