烟草马铃薯Y病毒外壳蛋白基因全长ORF的克隆与原核表达

摘　　要:

采集河南自然发病的烟草，通过摩擦接种至实验室烟草后直接提取总RNA，利用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增获得了烟草马铃薯Y病毒外壳蛋白（PVY—HN CP）基因；经NdeⅠ和SalⅠ双酶切处理的PCR产物，连接克隆至大肠杆菌表达载体pET28a（＋），构建了重组质粒pPVYCP，所获得的重组质粒经过酶切、测序鉴定，证实正确插入了PVY—HN CP基因的全长ORF．序列分析表明，PVY—HN CP基因由804个核苷酸组成，编码267个氨基酸残基；重组的pPVYCP表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS，经IPTG诱导，SDS—PAGE电泳显示分子量为32kDa的CP蛋白得到了诱导表达． (共4页)