草鱼消化道碱性蛋白酶的提取及鉴定

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摘　　要:

用丙酮将草鱼肠脱脂，磷酸盐缓冲溶液提取粗酶液，再用10％-40％饱和度的硫酸铵分级沉淀制取粗草鱼消化道碱性蛋白酶。粗草鱼碱性蛋白酶的比活力为2800U／g，最适作用温度为37℃，最适作用pH为10．3。在50℃保温30min后还保留60％以上的酶活力，要使其损失约80％的活力，需要在60℃保温30min。50mmol／L的甲苯磺酰赖氨酸氯甲酮（TLCK）、甲苯磺酰氟（PMSF）和50μmol／L大豆胰蛋白酶抑制因子（SBTI）分别抑制78．92％、75．98％和80．23％的酶活力。SDS-底物-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明碱性蛋白酶的活性成分有4种，一种为非丝氨酸蛋白酶，相对分子质量为105000；另外三种为胰蛋白酶，相对分子质量分别为26400、30750和43000。