摘 要:
目的 克隆与丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法 应用酵母双杂交系统3构建HCV核心蛋白诱饵质粒，转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合，在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选，筛选出30个阳性克隆，对既能在4缺营养缺陷培养基上生长（SD／－Trp-Leu-Ade-His）又能在涂有X－α半乳糖（X－α－gal）的四缺培养平面上长出蓝色菌落，提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后进行测序，进行生物信息学分析，将HCV核心蛋白基因分为大、中、小三段，与所克隆的未知功能基因回交，以证实其相互作用的部位。结果 分析的结果显示，其中1号克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有99％的同源性，初步证明了此基因与HCV核心蛋白有结合活性（GenBank号：AY032593），HCV核心蛋白的全长、2／3，1／3三段，回交显示三段均能在酵母中与此未知基因具有结合作用。结论 HCV核心蛋白结合蛋白肝细胞基因克隆成功，核心蛋白与此未知基因的作用部位应是氨基端，此项研究结果，为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索。 (共5页)
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