鲟形目鱼类rDNA扩增及限制性位点分析

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摘　　要:

使用长PCR技术扩增鲟形目（Acipenseriformes）15个种的核糖体DNA（rDNA）18SrRNA基因与28SrRNA基因之间约2．5kb的片段，并用7个限制性内切酶对该片段进行限制性位点分析。结果显示，使用LATaqDNA聚合酶及GCBuffer结合长PCR技术能够很好地扩增鲟形目鱼类的rDNA。根据酶切图谱可确定93个限制性位点，其中21个为保守位点，72个多态信息位点。Hha I酶切的带型在所有个体中完全一致，提示这些位点对保持rDNA的功能有重要作用。一些酶的酶切产物长度之和大于扩增产物的长度，暗示鲟形目鱼类个体内存在多个rDNA等位基因。对种间遗传距离进行计算，并构建UPGMA分子系统树，发现鲟科鱼类的系统关系与以往研究有较大差别，这可能是受个体内rDNA等位基因存在的影响，说明用酶切片段来重建鲟科鱼类的系统树不太可靠。文中还讨论了高GC含量模板的PCR扩增和rDNA在鲟形目分子系统关系中的使用。 (共6页)