摘 要:
以中华绒螫蟹（Eriocheir sinensis）肌肉、鳃和精巢为对照，从线粒体标志酶SDH活性、线粒体特异性荧光探针（Rh123）以及线粒体16S rDNA PCR扩增3个途径，探讨了该蟹精子线粒体的存在状况。研究发现，肌肉和鳃SDH酶活性较高，精巢SDH酶活性显著低于肌肉和鳃，而精子SDH酶活性则无法检测到。使用Rh123检测发现，精巢中有较强的荧光，而精子中则无法观察到。通过GenBank中的中华绒螯蟹线粒体16S rDNA序列设计引物，利用PCR扩增方法，以beta-actin做内参，检测了中华绒螯蟹肌肉、鳃、精巢和精子中线粒体16S rDNA扩增情况，发现各组织或细胞beta-actin扩增片段大小、条带宽度和亮度基本一致，表明各模板DNA量基本一致；而在同一DNA浓度下，16S rDNA的扩增片段长度虽一致，但其产物量存在明显差异，精子16S rDNA产物量显著低于其他3种组织，其条带宽度和亮度很弱；16S rDNA扩增产物经测序分析及比对证明与已有序列完全吻合。上述结果表明，中华绒螯蟹精子中存在线粒体，但其线粒体的数量极显著低于精巢和其他组织，这也是利用灵敏度较低的SDH酶活性和Rh123探针以及常规的组织学和超微结构观察法难以检测到其精子线粒体的原因。 (共5页)
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