摘 要:
为了克隆维生素E缺乏时皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）外套膜差异性表达的基因，本研究配制了维生素E缺乏水平（3．5mg／kg）和正常添加水平（52．8mg／kg）的人工饲料，喂养皱纹盘鲍幼鲍，初始体质量为（0．71±0．00）g，初始壳长为（15．49±0．04）mm，240d后，采用抑制消减杂交法（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）构建了维生素E缺乏组与正常组外套膜组织差异表达的cDNA消减文库。经检验，差异表达的基因均被富集了2^5～2^8倍，证明构建的cDNA消减文库具有很强的消减效率。从文库中随机挑取100个白色克隆摇菌液进行PCR鉴定，95％的克隆中均有100-900bp的插入片段，这些片段可能是维生素E缺乏差异表达基因的cDNA片段。选取含插入片段大小不同的48个克隆测序，其中有16个新基因，10个谷胱甘肽转移酶的基因，5个谷胱甘肽过氧化物酶基因，2个过氧化氢酶基因，3个羟基类固醇脱氢酶基因，4个酪氨酸激酶基因，1个类甲状腺过氧化物酶蛋白基因，3个纤维素酶基因，1个cAME效应元件结合蛋白基因，3个贝壳生物矿化相关蛋白的基因。总的来说，利用抑制消减杂交的方法构建差异表达cDNA文库，可以比较好地反映维生素E对皱纹盘鲍影响的基因信息，为研究其他营养素对皱纹盘鲍基因表达的影响提供了基础数据。[中国水产科学，2007，14（3）：383—389]
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