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一种简便高效利用重叠延伸PCR进行基因定点突变的方法

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苏燕[1] 邵国[1] 高嵩单[2] 于明华[2] 修瑞娟[2]

[1]包头医学院生物化学与分子生物学教研室,内蒙古包头014010 [2]中国协和医科大学中国医学科学院微循环研究所,内蒙古包头014010

《包头医学院学报》

2007年第23卷第6期

摘　　要:

目的：建立一种简便快速的重叠延伸PCR基因定点突变方法。方法：采用重叠延伸PCR的方法将人TGF-β2基因启动子区（-270bp～＋280bp）-114bp的5CGTG3序列定点突变为5TTG3：前两次PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后无需纯化，直接将胶条切下置于EP管中，-80℃冷冻10min，然后将胶条离心后分别取上清液作为模板进行第三次PCR，以获得全长的突变目的基因，最后将此突变基因插入报告载体pGL3-Basic进行基因测序。结果：人TGF-β2基因启动子区突变序列的测序结果与预期完全一致。结论：此方法简便经济、突变准确，是一种非常实用的基因定点突变方法。