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食管癌细胞NGAL基因-152~-60区段存在TPA反应元件

《生物化学与生物物理进展》2006年 第2期 | 许丽艳 李恩民 牛永东 蔡唯佳 袁华敏 常静霞 沈忠英 曾毅   北京工业大学生命科学与生物工程学院病毒与药理研究室 北京100022 汕头大学医学院肿瘤病理研究室 汕头515041 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室 汕头 515041

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摘 要:以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152~+84、-140~+84、-78~+84、-59~+84、-50~+84、-41~+84、-37~+84、-29~+84和-10~+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB.152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB.29和pGLB.10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL.TK共转染食管癌细胞ECl09,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染ECl09的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152~+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152~-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.
【分 类】 【生物科学】 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程) > 基因的重组【医药、卫生】 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 食管肿瘤
【关键词】 中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA反应元件
【出 处】 《生物化学与生物物理进展》2006年 第2期 140-148页 共9页
【收 录】 中文科技期刊数据库