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基于LC-MS和化学计量学的何首乌鉴别及炮制水蒸液成分转移研究认领

被引量： 2

作者：

周铭

学位授予单位：

北京中医药大学

摘要：

背景: 何首乌为蓼属植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根,现收载于2020版《中国药典》,为“生熟异治”中药的典型性代表,在我国具有悠久的使用历史。何首乌在临床使用的安全性和有效性是近年来讨论的重要问题。非蓼属植物的何首乌混伪品种,由于基源不同,可以通过化学分析鉴别。而何首乌、虎杖和毛脉蓼均为蓼属药用植物,前期研究表明毛脉蓼与何首乌和虎杖有相似的形态和化学成分,常规分析方法难以鉴别区分。典籍记载何首乌的炮制工艺种类繁多,以黑豆汁为辅料蒸制是现代何首乌主要炮制方法。值得注意的是,在蒸制过程中产生的水蒸液的物质基础尚不完全明确,对于依照药典方法将水蒸液拌入何首乌使其完全吸收仍缺乏数据支撑。目的: 本论文围绕何首乌的“基源鉴别-规范炮制”,对何首乌的药材来源,制何首乌水蒸液化学成分及拌回规范炮制进行研究。(1)建立基于特征化学成分的何首乌、虎杖和毛脉蓼的鉴别分析方法,并对这三种同属近似药用植物进行生物活性和毒性评价。(2)对何首乌炮制过程中的化学成分及水蒸液-制何首乌中水蒸液化学成分的转移进行研究,并结合抗氧化活性评价,阐释水蒸液拌入原药材炮制方法的科学性和合理性。方法: (1)通过TLC对三种蓼属植物进行分析;建立三种蓼属植物的HPLC指纹图谱;采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定毛脉蓼的化学成分;根据质谱数据和化学计量学分析,确定可以区分何首乌、虎杖和毛脉蓼的特征化学成分,通过质谱追踪对这些化合物进行分离,并通过核磁共振技术确定结构。采用CCK-8法检测三种蓼属植物乙醇提取物对HepG2细胞的细胞毒性,采用DPPH法和FRAP法检测其抗氧化活性。 (2)采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS对水蒸液的化学成分进行鉴定;建立水蒸液正丁醇萃取物的HPLC指纹图谱;通过DPPH法对水蒸液正丁醇萃取物及萃取物中小分子单体的抗氧化活性进行研究;通过HPLC-DAD对何首乌和不同蒸制次数的制何首乌以及拌回水蒸液和不拌回水蒸液的制何首乌中的9种化学成分进行含量测定;对UPLC-Q-TOF-MS采集的何首乌,拌回水蒸液的制何首乌和未拌回水蒸液的制何首乌质谱数据进行差异性分析研究。结果: (1)通过HPLC-DAD和UPLC-Q-TOF-MS对三种植物的化学进行了表征。基于LC-MS和化学计量学联用,以及化学分离和核磁共振分析工作的开展,确定了 pieceid-2"-O-gallate可以用于区分何首乌和虎杖,以及何首乌和毛脉蓼;6-hydroxymusizin-8-O-β-D-glucoside可以用于区分虎杖和毛脉蓼。这三种植物的乙醇提取物对DPPH具有显著的抑制活性,EC50值分别为0.8671、0.7176和0.4055 mg/mL。三者对HepG2细胞具有抑制活性,IC50 值分别为 0.260、0.089 和 0.116 mg/mL。 (2)从何首乌蒸制过程中得到的水蒸液初步鉴定64个化合物,主要为小分子酚酸类化学成分,并对制何首乌中9种主要化学成分的含量进行测定,初步揭示何首乌蒸制过程的化学物质转移。此外,水蒸液的正丁醇萃取物和萃取物中的小分子酚酸显示较强的抗氧化活性。拌入水蒸液的制何首乌与未拌入的制何首乌可以通过PCA和OPLS-DA区分开。

摘要译文

关键词：

何首乌; 虎杖; 化学计量学; 抗氧化活性; 毛脉蓼; 炮制; 水蒸液

学位年度：

2022

学位类型：

硕士

学科专业：

中药化学

导师：

张兰珍

中图分类号：

R283.3[炮制方法];R282.5[药材鉴定];O657.63[质谱分析⑨]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100802[中药炮制学];070302[分析化学];081704[应用化学];081706[分子化工];100803[中药鉴定学];100805[中药分析学]

D O I：

10.26973/d.cnki.gbjzu.2022.000250