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摘要： 目的研究Chlorin e6在肿瘤组织的富集情况,探索给药后最佳的超声辐射时间。方法 S180肉瘤荷瘤小鼠腹腔注射Chlorin e6后,利用共聚焦显微镜观测其在肿瘤和周围肌肉组织的富集变化及代谢。结果腹腔给药18h后,Chlorin e6在肿瘤和周围肌肉组织含量均达最高峰,且差异最明显,此时为最佳的超声辐射时间。结论 Chlorin e6具有肿瘤靶向性好、正常组织清除快的优点。Chlorin e6声动力疗法的时间点应选择在18h左右。
关键词: Chlorin ；e6 ；S180肉瘤 ；共聚焦显微镜 ；超声波 ；声动力疗法
被引量
2
摘要： 目的:设计合成^(18)F标记的新型短链脂肪酸代谢型显像剂2-^(18)F-氟丁酸(2-^(18)F-FBA),对其作为肿瘤PET/CT显像剂进行初步研究。方法:前体2-溴丁酸甲酯通过^(18)F-亲核取代反应实现放射性标记,中间体2-^(18)F-氟丁酸甲酯经高效液相色谱法分离纯化,收集时间在16~18 min的中间体,20 mL纯水稀释后过C18柱,并用10 mL纯水冲洗,吹干,此时中间体被吸附,使用1 mL NaOH溶液水解,得到2-^(18)F-FBA。目测产品的澄清度,测定pH值,检测放射化学纯度和稳定性。经美国癌症研究所健康小鼠尾静脉注射2-^(18)F-FBA(0.2 mL,7 MBq),检测2-^(18)F-FBA在正常小鼠体内的生物学分布。S180肉瘤荷瘤小鼠行micro-PET/CT显像,并进行图像分析和计算SUV max。各组织器官不同时间点生物学分布的比较采用Student t检验。结果:2-^(18)F-FBA的合成时间约为40 min,放射化学产率为(40±5)%(经时间校正),放射化学纯度>98%。产品溶液澄清无颗粒,pH值为7.2,体内外的稳定性良好。体内生物学分布的结果显示,注射2-^(18)F-FBA 5 min后,小鼠肝脏、心脏以及肺的放射性摄取较高,脑组织在各个时间点摄取均较低,代谢60 min后各脏器放射性摄取趋于稳定,骨骼的放射性摄取率随时间的延长均较低,但5 min与30、90 min比较,差异均无统计学意义(t=1.532、1.104,均P>0.05)。S180肉瘤荷瘤小鼠micro-PET/CT图像显示,注射2-^(18)F-FBA 30 min后肿瘤处放射性摄取较高,而此时周围组织脏器摄取较低,60 min后肿瘤摄取达到最大值,SUV max=1.90±0.03,但肝脏以及肠道等腹腔脏器亦有放射性摄取。结论:2-^(18)F-FBA的合成操作简便,合成时间短,放射化学产率较高,是一种具有潜在应用价值的新型脂肪酸代谢型显像剂。
关键词: 正电子发射断层显像术 ；体层摄影术 ；X线计算机 ；肿瘤 ；生物学分布 ；2-^(18)F-氟丁酸
被引量
2
摘要： 血卟啉单甲醚(代号PsD-044)是一种新的肿瘤光化学诊治剂。本文报道用荧光分光光度法测定PsD-044在S_(180)肉瘤荷瘤小鼠体内的分布及肿瘤与不同组织问的分布比。静注20 mg/kg的PsD-044 30 min后,不同组织中的药物浓度均达峰值。药后3 h,药物在肿瘤与皮肤及骨骼肌间的分布差距最大,肿瘤/皮肤和肿瘤/骨骼肌分布比分别为3和12.2。此时,各组织中的药物浓度依次为肝>肿瘤>肺>皮肤>肾>脾≈心肌≈骨骼肌。药物从组织中消除较快。实验结果表明,PsD-044未能透过血-脑屏障而进入脑组织。在小鼠体内的药物动力学符合三房室模型,所测的主要药物动力学参数与组织分布测定结果基本一致。
关键词: 血卟啉单甲醚 ；肿瘤 ；光化学诊治剂
被引量
9
摘要： 目的研究99TcmECDG在S180肉瘤荷瘤小鼠体内的分布规律,为其用于临床肿瘤显像作基础研究。方法将S180肉瘤荷瘤小鼠48只分成8组,实验前小鼠禁食8h以上。尾静脉注射99TcmECDG3.7MBq(100μCi)后5min、15min、30min、1h、2h、4h、8h和24h放血处死,取心、肝、脾、肺、脑、肾、肌肉、骨、小肠、胃、血液和肿瘤等组织或器官,称重并测量其放射性,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及肿瘤与血液、肌肉、肺、肝的放射性比值。同时,荷瘤小鼠5只,禁食,尾静脉注射99TcmECDG18.5MBq(500μCi)后相同时间进行显像。结果肿瘤组织与血液、肌肉、肺、肝的放射性比值随时间的延长逐渐上升,在4h时都超过1.0。显像结果与生物分布实验结果一致,随时间的延长瘤体周围组织放射性逐渐下降,而瘤体在4h时显影清晰。结论99TcmECDG在S180肉瘤荷瘤小鼠体内的生物学分布结果表明,其可用于肿瘤的葡萄糖代谢显像。
关键词: ^99Tc^m标记葡萄糖 ；EC-DG ；S180肉瘤荷瘤小鼠 ；生物学分布
【会议论文】 •
+4位作者
会议名称： 2012医学科学前沿暨第二届个体化治疗与抗肿瘤药物研究新趋向研讨会
会议时间： 2012-07-13
摘要： 目的：声动力治疗是通过超声波激活肿瘤细胞内聚集的声敏剂治疗肿瘤的一种新方法.本实验用Chlorin e6为声敏剂,观测其在S180肉瘤荷瘤小鼠肿瘤组织的富集情况及联合超声对S180肉瘤的杀伤作用。方法：S180肉瘤荷瘤小鼠腹腔注射Chlorin e6后,共聚焦显微镜观测其在肿瘤的富集情况,18h后超声处理(1.0 MHz频率,180s),每2d测量肿瘤大小,第15d剥离瘤体进行重量比较.结果：腹腔给药后24h内,Chlorin e6在肿瘤组织含量显著高于周围正常肌肉组织,18h时肿瘤组织含量达最高峰,且与周围正常肌肉组织差异最明显,此时为最佳的超声辐射时间.单独使用超声照射(0.4～1.6W/cm2)或单独注射Chlorin e6(10～40 mg/kg)对小鼠S180肉瘤无明显杀伤作用.Chlorin e6联合超声可明显抑制肿瘤生长,抑瘤率随超声强度(0.4～1.6W/cm2)和Chlorin e6浓度(10～40mg/kg)的增加而增强,且未见光照性皮炎等毒副反应.结论：Chlorin e6在S180肉瘤荷瘤小鼠具肿瘤靶向特异聚集性,联合超声介导的SDT对小鼠S180肉瘤有明显杀伤作用.
关键词: 肉瘤 ；声动力疗法 ；临床试验 ；疗效评价
摘要： 目的:髓样抑制细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSCs)是指髓系来源的、未成熟的、对T细胞介导的免疫应答具有抑制作用的一群异质细胞。MDSCs细胞可抑制机体免疫细胞发挥正常固有性免疫和特异性免疫,使免疫细胞处于无应答或者耐受状态而不能及时清除变异的癌前细胞,失去杀伤肿瘤细胞的能力。MDSCs细胞还通过非免疫机制如促进肿瘤新生血管形成、肿瘤细胞侵袭及转移,参与调节肿瘤的生物学行为。MDSCs细胞对于肿瘤及其他疾病的负向调节作用得到了越来越多的重视,调控MDSCs细胞及其免疫抑制功能可能是一种潜在的癌症治疗方法。蛋氨酸脑啡肽(Methionine enkephalin,MENK)是一种由五个氨基酸残基组成的内源性阿片肽,具有自分泌旁分泌特点,广泛存在于神经内分泌系统。MENK具有显著的免疫调节作用及抗肿瘤作用。通过调控阿片受体表达与阿片受体结合,MENK可诱导肿瘤细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,对多种肿瘤如黑色素瘤,脑胶质瘤,肺癌及胃癌等产生抗肿瘤作用。MENK也可以通过对免疫系统细胞产生免疫调节作用,直接增强免疫系统细胞对肿瘤细胞的杀伤作用或改变肿瘤微环境进而发挥抗肿瘤作用。我们前期对MENK的免疫调节作用进行了系统研究,证实了MENK对T细胞,巨噬细胞,NK细胞及DC细胞均有调节作用,但是MENK对于MDSCs细胞的调控作用及机制尚未明确,需进一步论证。我们通过MENK作用于荷瘤小鼠脾脏及骨髓MDSCs细胞体外实验及MENK作用于s180肉瘤荷瘤小鼠体内实验的研究,探讨MENK对MDSCs细胞的免疫调节功能及作用机制,完善MENK免疫调节作用网络。实验方法:本研究分别通过体外实验和体内实验探讨MENK对荷瘤小鼠MDSCs细胞的调控作用。体外实验中采用8-10周雌性C57BL/6J小鼠,通过双侧腋皮下注射腹水瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,应用流式细胞术检测荷瘤小鼠与正常小鼠各器官中MDSCs细胞分布情况;免疫磁珠阳性分选荷瘤小鼠脾脏及骨髓的髓样抑制细胞,体外培养并分别给予不同剂量MENK刺激,应用CCK8法检测MDSCs细胞增殖及活性,确定体外实验最佳浓度;分别采用MENK及MENK联合阿片受体阻断剂纳曲酮(Naltrexone,NTX)刺激体外培养的骨髓及脾脏来源的MDSCs细胞进行后续实验研究:应用流式细胞分析技术分别检测各组MDSCs细胞中ROS含量,应用RT-qPCR技术检测MDSCs细胞μ和δ阿片受体mRNA表达水平,应用ELISA法检测MDSCs细胞上清分泌细胞因子IL-1β,IL-4,IL-6,IL-10及TGF-β1水平。体内实验中建立与体外实验相同的荷瘤小鼠模型,经MENK或MENK联合NTX连续腹腔注射治疗14天后,检测荷瘤小鼠肿瘤体积、重量变化;伊红-苏木精染色观察肿瘤组织形态学变化;免疫组织化学法分别检测肿瘤组织中CD11b+细胞及Gr-1+细胞表达情况;ELISA法检测小鼠血清中细胞因子IL-1β,IL-4,IL-6,IL-10及TGF-β1变化;免疫磁珠阳性分选治疗后的荷瘤小鼠MDSCs细胞,应用流式细胞术检测荷瘤小鼠脾脏和骨髓MDSCs细胞及其亚群比例变化;RT-qPCR法检测MDSCs细胞阿片受体MOR和DOR基因表达水平,检测MDSCs细胞免疫抑制功能相关分子Arg-1、iNOS的mRNA表达水平,检测MDSCs细胞中基因Ets-1,sted1b的mRNA表达水平。实验结果:1、与正常小鼠相比,荷瘤小鼠免疫器官中MDSCs细胞含量及比例增加。流式细胞术分析结果显示正常小鼠脾脏和外周血MDSCs细胞含量及比例低于荷瘤小鼠(P<0.01),荷瘤小鼠器官中MDSCs细胞所占比例由高至低依次为:骨髓、外周血、肿瘤组织、脾脏、淋巴结和胸腺。2、经免疫磁珠阳性分选总体MDSCs细胞及其亚群细胞纯度均显著提高,脾脏来源MDSCs细胞纯度>80%,骨髓来源MDSCs细胞纯度>90%。3、MENK对体外培养MDSCs细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,最佳浓度为1.25mg/ml。4、与对照组相比MENK降低脾脏来源MDSCs细胞中ROS的含量(P<0.05),骨髓来源MDSCs细胞中ROS含量呈下降趋势。5、与对照组相比MENK上调MDSCs细胞MOR和DOR基因表达水平(P<0.01),NTX可阻断此效应。6、MENK促进脾脏来源MDSCs细胞分泌IL-4(P<0.05),促进骨髓来源MDSCs分泌IL-6(P<0.05),其他细胞因子未表现出显著变化。7、经MENK腹腔注射治疗后,荷瘤小鼠肿瘤及体积均显著降低(P<0.05),H-E染色结果显示与对照组相比MENK组在肿瘤组织交界处淋巴细胞侵润明显增加增加;免疫组织化学染色结果显示荷瘤小鼠肿瘤组织中,经MENK治疗后Gr-1阳性细胞与其他两组相比减少,CD11b阳性细胞在三组间无明显变化。8、ELISA结果显示经MENK治疗后荷瘤小鼠血清中TGF-β1下降,IL-4、IL-6及IL-10含量增加(P<0.05)。9、MENK显著下调荷瘤小鼠脾脏中总体MDSCs细胞比例(P<0.05),降低PMN-MDSCs比例(P<0.01),增加M-MDSCs比例(P<0.05),骨髓中MDSCs细胞及其两个亚群所占比例均呈下降趋势。10、MENK提高MDSCs细胞中Arg-1基因表达水平,下降iNOS基因表达水平(P<0.05);MENK下调MDSCs细胞中setd1b及Ets-1基因表达水平(P<0.01)。11、MENK体内治疗上调MDSCs细胞MOR和DOR基因表达水平(P<0.01),在脾脏中NTX可完全阻断这种作用(P<0.01)。结论:1、肿瘤发生环境中,小鼠各免疫器官中MDSCs细胞增多。2、MENK对荷瘤小鼠MDSCs细胞具有负向调节作用,抑制MDSCs细胞增殖,降低荷瘤小鼠脾脏及骨髓中MDSCs细胞比例,削弱MDSCs细胞的免疫抑制功能同时抑制肿瘤增长。3、MENK对MDSCs细胞两个主要亚群的具有不同调节作用,MENK主要通过降低荷瘤小鼠脾脏中PMN-MDSCs亚群比例,降低总体MDSCs细胞比例。4、MENK可能通过MDSCs细胞中μ和δ阿片受体结合,影响MDSCs细胞中Ets-1及setd1b基因表达,干扰MDSCs细胞的免疫抑制功能。
关键词: 蛋氨酸脑啡肽 ；髓样抑制细胞 ；阿片受体 ；免疫调节
摘要： 目的:观察褐藻多酚Eckol的抗肿瘤作用,并探讨其可能的作用机制,为Eckol在肿瘤防治中的应用提供实验依据。方法:1、Eckol的抗肿瘤作用研究:分别建立移植型S180腹水瘤及肉瘤荷瘤小鼠模型,造模前预防性给予生理盐水或Eckol(0.25mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg)7天。S180腹水瘤小鼠模型造模后继续给药15天,每天记录小鼠活动状态,记录小鼠生存天数。S180肉瘤荷瘤小鼠模型造模后继续给药10天,每天记录小鼠体重,记录小鼠生长曲线,最后一次给药1h后,处死小鼠,分离脾脏和胸腺,计算脾指数和胸腺指数;剥取肉瘤组织,称重;HE染色观察肿瘤组织病理变化;TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡;以Western blot法测定瘤组织EGFR、Bcl-2、Caspase-3的表达水平。2、Eckol对S180肉瘤荷瘤小鼠免疫功能的影响:建立移植型S180肉瘤荷瘤小鼠模型,造模前预防性给药7天,造模后继续给药10天。取小鼠外周血血清,ELISA法检测IL-2、IL-10、TNF-α、IFN-γ、TGF-β的水平;以碳粒廓清法了解小鼠外周血单核-吞噬细胞的吞噬功能;取外周血,流式细胞术测定小鼠外周血T细胞亚群分布;分离小鼠脾脏,磨碎后过滤、种板,ConA诱导脾细胞转化,MTT法检测Eckol对脾细胞转化的影响;免疫组化法测定CD11c阳性细胞在肿瘤组织中的分布,了解肿瘤组织树突状细胞浸润情况;从小鼠骨髓中获得小鼠骨髓来源的单核细胞,用含IL-4和GM-CSF 20ng/ml的RPMI 1640培养基培养7天,诱导分化为树突状细胞。收集细胞,流式三标法(CD11c、CD86、MHC-II)检测髓源性树突状细胞表型。3、Eckol对Reg3A诱导人胰腺癌SW1990细胞过度增殖的影响:体外培养SW1990细胞,Eckol(0、1.25、2.5、5、10、20、40μg/ml)处理细胞48h,加入50ng/ml的外源性Reg3A蛋白共处理24h后,MTT法检测细胞存活率。选取Eckol(5、10、20μg/ml)三个浓度组,Eckol处理细胞48h后,50ng/ml外源性Reg3A蛋白共处理24h,流式细胞术测定细胞周期;软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Real Time PCR法检测JAK2、STAT3、NF-κB、Cyclin D1 mRNA表达;Western blot法检测JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3、NF-κB、Cyclin D1蛋白水平表达。结果1、Eckol的抗肿瘤效应:Eckol体内干预可延长移植型S180腹水瘤荷瘤小鼠生存天数;移植型S180肉瘤荷瘤小鼠模型中,Eckol呈剂量依赖性地降低肉瘤重量,升高脾指数,且不明显改变动物生存曲线。肿瘤组织HE染色结果显示,Eckol处理组中,肉瘤组织微血管减少,坏死增加,核固缩明显,癌巢周围发现单核细胞浸润。TUNEL染色结果显示,Eckol处理组肿瘤细胞凋亡增加。肿瘤组织内凋亡蛋白Caspase-3表达上升,抑凋亡蛋白Bcl-2和增殖相关蛋白EGFR表达下降。提示Eckol体内抗肿瘤效应明显。2、Eckol对移植型S180肉瘤荷瘤小鼠免疫功能具有显著调节作用:ELISA结果显示,Eckol处理组S180肉瘤荷瘤小鼠血清中细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ显著升高,提示Eckol能够调节Th1/Th2平衡,促进Th1介导的细胞免疫;此外,Eckol提高荷瘤小鼠外周血单核-吞噬细胞的吞噬功能,促进脾淋巴细胞转化,调节外周血T细胞亚群比例。免疫组化及流式结果显示,Eckol能够促进肿瘤组织树突状细胞的浸润,且影响树突状细胞表型,促进髓源性树突状细胞成熟。提示,Eckol体内抗肿瘤效应极可能与其对荷瘤小鼠的免疫功能的调节作用相关。3、Eckol对Reg3A诱导SW1990细胞过度增殖的抑制作用:MTT法显示,5-20μg/ml Eckol对SW1990细胞增殖没有明显的体外抑制作用,但Eckol+Reg3A与Reg3A单独作用相比,细胞存活率下降。细胞周期检测发现,与Reg3A单独作用相比,Eckol+Reg3A组S期和G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞增多。软琼脂克隆形成实验结果显示,Eckol+Reg3A组的克隆数比Reg3A组克隆数明显减少。Real Time PCR和Western blot结果发现,Reg3A可以上调JAK2、STAT3、NF-κB、Cyclin D1 mRNA及蛋白的表达水平,而Eckol可浓度依赖性地抑制这些上调作用。提示,Eckol体外对Reg3A诱导SW1990细胞过度增殖具有抑制作用,其机制可能与JAK2/STAT3和NF-κB/Cyclin D1信号通路相关。结论1、Eckol具有显著抗肿瘤效应,其体内抗肿瘤效应的发挥可能与其调节荷瘤小鼠免疫功能密切相关。2、Eckol体外可抑制胰腺炎症相关介质Reg3A蛋白诱导的胰腺癌SW1990细胞过度增殖,提示Eckol对伴随炎症的胰腺癌的恶性进展具有潜在的抑制效应,其机制可能与JAK2/STAT3和NF-κB/Cyclin D1信号通路相关。
关键词: Eckol ；肿瘤 ；免疫调节 ；树突状细胞 ；胰岛衍生蛋白Reg3A
被引量
8
摘要： 目的:体外实验主要研究MENK通过调控阿片受体亚基对CD8+ T细胞功能的影响。体内实验主要研究MENK对C57BL/6荷瘤小鼠脾中CD8+ T细胞转录组的影响,以及对lncRNA及mRNA的差异基因表达的影响,并对差异表达基因进行富集分析,找出MENK调控CD8+ T细胞的信号通路。研究方法:1.体外实验采用阴性富集法分离纯化C57BL/6小鼠脾脏CD8+ T细胞,在RNA和蛋白水平分别采用real-time PCR和western blot检测MENK对CD8+ T细胞的MOR和DOR表达的影响。在MENK的作用剂量上我们选择了0、10-77 M、10-88 M、10-99 M、10-1010 M、10-1111 M。为了阻断μ受体的表达,我们选择了μ受体选择性阻断剂CTAP进行后续实验,分别采用0、4.5μM、450 nM、45 nM、4.5 nM对活化的CD8+ T细胞加药培养48 h,之后分别采用real-time PCR和western blot对MOR和DOR的RNA和蛋白表达水平进行检测。为了阻断δ受体的表达,我们采用δ受体选择性阻断剂NTI进行后续实验,分别采用0、10μM、1μM、100 nM、10 nM对活化的CD8+ T细胞加药培养48 h,之后分别采用real-time PCR和western blot对MOR和DOR的RNA和蛋白表达水平进行检测。为了同时阻断μ和δ受体,我们选择了非选择性阿片受体拮抗剂NTX体外阻断CD8+ T细胞的阿片受体表达,分别采用0、13μM、1.3μM、130 nM、13 nM对活化的CD8+ T细胞加药培养48 h,之后分别采用real-time PCR和western blot对MOR和DOR的RNA和蛋白表达水平进行检测。为了研究不同阿片受体对CD8+ T细胞表型和功能的影响,我们采用流式细胞术对CD8+ T细胞表面的CD28、PD-1、CTLA-4、FasL和胞内的GrzB、Prf进行了检测。为了研究MENK对CD8+ T细胞增殖的影响,我们采用阴性富集法对细胞进行分离纯化,进行CFSE染色后加入CD3、CD28抗体激活刺激,药物分组为对照组、MENK组、CTAP+MENK组、NTI+MENK组、NTX+MENK组,各组均加药培养3天,然后采用流式细胞术检测细胞的增殖。2.采用C57BL/6 S180肉瘤荷瘤小鼠模型研究MENK体内对S180肉瘤的抗肿瘤作用及脾中CD8+ T细胞转录组的影响。采用磁珠分选法阴性富集MENK治疗组及对照组小鼠脾中的CD8+ T细胞,采用高通量RNA转录组测序分析MENK对纯化后各组中CD8+ T细胞lncRNA及mRNA的影响。采用Cuffdiff软件对拼接后的转录本进行差异表达分析,使用基于负二项分布的模型,筛选条件为P-adjust<0.05。采用GOseq R包对差异表达基因的mRNA和lncRNA靶基因进行GO（基因本体）富集分析,筛选条件为校正后的P value小于0.05具有统计学差异,GO显著富集。采用KOBAS软件对本次测序中预测的差异表达mRNA和lncRNA进行KEGG信号通路富集。为了进一步验证差异表达基因,我们选择KEGG中富集的具有显著性差异的信号通路进行real-time PCR实验验证,主要验证的靶基因为cell cycle（P=0.005）通路中的CCnd3、Cdc7、Anapc4、Smc3、Atm;P53 pathway（P=0.007）中的Pten、Atr、Casp8、Ccnd3、Atm;Ras pathway（P=0.028）中的Rasgrp2、Pak2、Bad、Ets-1、Rap1b、Rala、Tbk1、Rasa3;Neurotrophin signaling pathway（P=0.005）中的Kidins220、Rap1b、Matk、Prkcd、Camk2b、Bad、Rps6ka3;经典阿片受体MOR、DOR。主要验证的差异表达lncRNA为GM27008、Snhg6、Tug1和Pvt1。结果:1.MENK在体外可以促进CD8+ T细胞中阿片受体的表达,在RNA水平上,MENK可以促进MOR和DOR的表达,最佳的作用浓度是10-1010 M,在此作用浓度相对于对照组MOR的表达量为2.03±0.21,DOR的相对表达量为1.89±0.45,差异有统计学意义（P<0.05）。CTAP处理后能够显著下调MOR的RNA和蛋白表达水平,各实验浓度的相对蛋白表达量依次为1.13±0.02、0.62±0.01、0.85±0.01、0.62±0.05、0.63±0.01,差异有统计学意义（P<0.05）。在RNA水平NTI能够显著抑制DOR的表达,同时上调MOR的表达（P<0.01）。在1μM作用下,DOR的相对表达显著下调,其对应的相对表达量为0.75±0.04,而MOR的相对表达出现上调,其对应的相对表达量为2.88±0.37,差异有统计学意义（P<0.01）。蛋白的实验结果与RNA水平相互验证,在1μM作用下,DOR的蛋白表达显著下调,蛋白条带相对于内参的相对表达量为0.56±0.02,MOR的蛋白条带相对于内参的表达量为1.09±0.05。在RNA水平NTX能够同时显著抑制MOR和DOR的表达,在1.3μM浓度作用时,MOR相对于β-actin的表达量为0.28±0.01,DOR相对于β-actin的表达量为0.35±0.03（P<0.01）。在蛋白水平表达结果与RNA水平趋势一致,在1.3μM浓度作用时,MOR相对于β-actin的表达量为0.44±0.02,DOR相对于β-actin的表达量为0.51±0.03（P<0.01）。MENK处理组CD8+ T细胞表面的CD28、PD-1、CTLA-4、FasL和胞内的GrzB表达显著上升（P<0.01）,选择性阻断MOR（CTAP+MENK）或DOR（NTI+MENK）后上述指标表达水平显著下降,而同时阻断MOR和DOR（NTX+MENK）后CD28、PD-1、CTLA-4、Fas L和GrzB的表达水平进一步下降。MENK处理组可显著增强CD8+ T细胞的增殖（P<0.01）;单纯阻断MOR（CTAP+MENK）或DOR（NTI+MENK）后不能阻断MENK对CD8+ T细胞的增殖作用,同时阻断MOR和DOR后,MENK对CD8+ T细胞的增殖作用消失。2.MENK治疗对S180肉瘤具有显著的抗肿瘤作用。对实验组和对照组脾中CD8+ T细胞进行转录组测序后,基于转录组拼接结果,经过严格筛选,共预测得到845个不具有编码潜能的lncRNA。我们对差异表达的lncRNA、TUCP及mRNA进行了后续的聚类分析和GO及KEGG富集分析。MENK组相对于对照组差异表达的lncRNA有8个上调基因,5个下调基因;差异表达的TUCP有3个上调基因,7个下调基因;差异表达的mRNA有301个上调基因,240个下调基因。差异lncRNA靶基因GO富集分析结果主要为GO:0005251（delayed rectifier potassium channel activity）,GO:0008076（voltage-gated potassium channel complex）,GO:0034705（potassium channel complex）,GO:0005249（voltage-gated potassium channel activity）,GO:0034702（ion channel complex）,GO:0043269（regulation of ion transport）;差异mRNA GO富集分析结果主要为GO:0005634（nucleus）,GO:0044260（Cellular macromolecule metabolic process）,GO:0044428（nuclear part）,GO:0005622（intracellular）,GO:0031981（nuclear lumen）,GO:0044237（Cellular metabolic process）。差异表达lncRNA靶基因KEGG富集分析结果主要为Thyroid cancer（Mmu05216）,Cholinergic synapse（Mmu04725）,Bladder cancer（Mmu05219）,Fox O signaling pathway（Mmu04068）,Endometrial cancer（Mmu05213）,Acute myeloid leukemia（Mmu05221）;差异表达mRNA靶基因KEGG富集分析结果为Ribosome（Mmu03010）,Viral carcinogenesis（Mmu05203）,Amphetamine addiction（Mmu05031）,P53 signaling pathway（Mmu04115）,Neurotrophin signaling pathway（Mmu04722）,Alzheimer’s disease（Mmu05010）。通过Real-time PCR对预测的差异表达基因进行实验验证,证实具有统计学意义的差异表达mRNA为bcl-2、Bax、Rap1b、Pak2、Rasa3、Bad、Pten、Rasgrp2、MOR、DOR,其中表达上调的mRNA为:bcl-2、Pak2、MOR、DOR,表达下调的mRNA为:Bax、Rap1b、Rasa3、Bad、Pten、Rasgrp2;差异表达的lncRNA为GM27008和Pvt1,并且经过实验验证GM27008和Pvt1的RNA相对表达均为显著上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.MENK通过上调μ和δ阿片受体调控CD8+ T细胞的增殖和功能表型;MENK对CD8+ T细胞的调控作用可以在μ或δ单独或同时被阻断时消失;MNEK可能通过调控阿片受体的联合亚基发挥重要的免疫调节功能。2.MENK对S180肉瘤具有显著的抗肿瘤效果;MENK治疗可提高荷瘤鼠脾和淋巴结中CD8+ T细胞的比例。MENK治疗能够显著影响荷瘤鼠脾中CD8+ T细胞转录组中mRNA及lncRNA的表达。
关键词: 蛋氨酸脑啡肽 ；CD8+ T细胞 ；阿片受体 ；免疫调节 ；转录组学 ；RNA测序
被引量
1
摘要： 碳纳米管具有良好的细胞膜穿透性，并且可通过吸附、化学偶联或者包合作用携带化学药物或者生物大分子穿过细胞膜，进入细胞或组织，在传递药物方面有着潜在的优势。然而，未加修饰的碳纳米管表面疏水性强，在细胞中易聚集，毒性较大，不适合作为药物载体。本课题旨在通过表面共价修饰的方法，将磁性Fe3O4纳米粒和具有肿瘤靶向性和亲水性的透明质酸多糖接枝到碳纳米管上，得到一种高水溶性、低毒性的磁性碳纳米管，通过物理吸附（π-π）堆积的作用装载化疗药物多西他赛（Docetaxel，DTX），构建一个水溶性良好的磁靶向给药系统，并以人乳腺癌MCF-7细胞和S180肉瘤荷瘤小鼠为对象考察其体内外抗肿瘤活性。
首先，通过一系列的羧基化、氨基化以及还原反应，将Fe3O4纳米粒负载到碳纳米管上，得到超顺磁性的碳纳米管，再通过酯化反应将分子量14000～20000的透明质酸接枝到碳纳米管表面，得到水溶性、形态、粒径、电位均良好的磁性碳纳米管（CNTs-Fe3O4-HA）。并通过傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、激光纳米粒度分析仪(DLS)、振动样品磁强计（VSM）以及透射电子显微镜（TEM）等对其合成过程及磁性行为进行表征，结果表明载体系统制备成功且具有良好的超顺磁性。
其次，以合成的CNTs-Fe3O4-HA为载体，DTX为模型药物，通过物理吸附π-π堆积的作用构建CNTs-Fe3O4-HA/DTX给药系统，通过单因素考察优化处方设计，所得的CNTs-Fe3O4-HA/DTX给药系统载药率高达160%，所得制剂药物浓度高达2.3mg·ml-1，其在各个介质中可长期稳定存在，具有作为纳米给药系统的潜力。
本研究以人乳腺癌MCF-7细胞为实验对象考察该给药系统的体外抗肿瘤活性。细胞毒性实验表明CNTs-Fe3O4-HA对细胞无明显毒性，而与DTX相比，CNTs-Fe3O4-HA/DTX在作用时间为72h时表现出较强的细胞抑制，表明该给药系统具有一定的缓释作用。细胞摄取实验表明CNTs-Fe3O4-HA可高效率的穿透细胞膜，促进了DTX的跨膜转运。
此外，以S180肉瘤荷瘤小鼠为模型动物，考察CNTs-Fe3O4-HA/DTX给药系统的组织分布以及体内抗肿瘤活性。组织分布实验表明，CNTs-Fe3O4-HA可提高药物在肿瘤部位的浓集，降低DTX的肺毒性，且在外加磁场作用下长期连续给药后可有效提药物在肿瘤部位的浓度，降低DTX在肺中的分布，且在外加磁场作用下长期连续给药后可显著提高药物在肿瘤部位的分布，该结果表明，CNTs-Fe3O4-HA/DTX在体内具有显著的磁靶向能力。体内抗肿瘤实验表明，CNTs-Fe3O4-HA/DTX给药系统提高了DTX的抗肿瘤活性，且在外加磁场作用下，CNTs-Fe3O4-HA/DTX给药系统对肿瘤体积的增长抑制更加明显。
关键词: 碳纳米管 ；透明质酸 ；药物载体 ；磁靶向给药系统
被引量
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摘要： 背景：恶性肿瘤已成为危害人类健康和生命的主要疾病之一。据目前最新调查结果显示:我国肿瘤引起的死亡率在所有疾病病因中居第2位(占17.9％)，并且发病率呈上升趋势。如何诊治肿瘤是目前医学界的重大难题之一，继传统的手术、化疗及放疗等治疗方式之后，肿瘤的分子靶向治疗在现代肿瘤治疗模式中产生了划时代的意义。然而，目前研发的靶向药物虽然副作用较小，但只对部分具有特异性靶点的肿瘤疗效好，而大部分肿瘤患者的获益率低。因此，寻找靶向性好、副作用小、总体人群有效率高的恶性肿瘤治疗新方法，是肿瘤界面临的重大课题。声动力学疗法(Sonodynamic therapy，SDT)是在光动力学疗法（Photodynamic therapy，PDT）的基础上发展起来的一种肿瘤治疗新理念，是通过静脉注射或口服声敏剂，声敏剂通过血流靶向性在肿瘤组织中聚集，然后利用低强度的超声照射肿瘤，以声能激活声敏剂，使其在肿瘤局部产生一系列理化反应（如声致发热、单线态氧、羟自由基等），导致肿瘤细胞不可逆性损伤，而达到抗肿瘤治疗的一种新手段。SDT将超声深部无创穿透能力及精确定位能力与声敏剂对肿瘤组织的靶向性相结合，确保了对表浅及深部的各种肿痛靶向性治疗。因其无创性和靶向性成为肿瘤治疗的一种新方法，有着广阔的发展前景。但是既往使用的声敏剂多为血卟啉的衍生物（如HPD、PhotofrinⅡ），存在声动力效应差、靶向性不高、排泄缓慢，易发生光敏反应等问题。虽以叶绿素为原料合成的新型声敏剂如二氢卟吩e4、二氢卟吩e6，克服了血卟啉衍生物的缺点，但国内无知识产权，进口价格昂贵，亦限制了其在声动力治疗领域的应用。我们以光合作用强、毒副作用小的叶绿素为原始合成原料，通过计算机模拟分子结构改造、修饰等过程，在叶绿素卟啉母体上引入两个特定的长链型氨基酸基团作为接收声波的“天线”，合成新型声敏剂Sonoflora。目前Sonoflora的生物学效应、毒理实验及光声谱性质已被验证;但声敏剂在肿瘤细胞及组织的靶向性聚集、抗肿瘤作用以及安全性，仍未开展。本实验将通过采用激光共聚焦实验、肿瘤抑制试验、血常规生化检验等方法验证声敏剂在小鼠S180肉瘤模型中靶向聚集性、抗肿瘤效应、毒副反应等;为最终挑选出高效、低毒且具有自主知识产权的新型声敏剂奠定实验基础，并将推动声动力治疗在临床肿痛靶向性治疗领域的发展及应用，具有重大的理论意义、社会效益和经济效益。
目的：本研究的第一个目的是采用用共聚焦显微镜观测Sonoflora在小鼠S180肉瘤模型中肿瘤靶向聚集性，探索给药后最佳的超声辐射时间。第二个目的是研究Sonoflora联合超声对S180肉瘤的杀伤作用，探索最佳的声动力治疗模式。第三个目的是研究观察Sonoflora（10、20、40 mg/kg）腹腔注射后3h～72h对S180肉瘤荷瘤小鼠血常规、生化指标的影响，判断其安全性。
方法：⑴S180肉瘤细胞株在小鼠腹腔传代7次，待细胞株生长稳定后，取腹腔传代第8天的S180肉瘤细胞悬液，加无菌生理盐水，调节细胞浓度为1×107个/ml。去除小鼠右侧腋毛，取0.2ml细胞悬液接种于小鼠右腋皮下。腋下接种7天后，电了游标卡尺测得肿瘤平均直径约0.7cm后用于实验。⑵选取肿瘤大小均一，体重相近的荷瘤小鼠35只，随机分7组，每组5只。在暗室内腹腔注射Sonoflora10mg/Kg，避光避声饲养，分别于注射后3、6、12、18、24、48、72h断颈处死荷瘤小鼠，剥离肿瘤和正常肌肉组织，制备冰冻切片，并在激光共聚焦显微镜下观测肿瘤和肌肉组织的荧光显像及荧光强度（显示为红色荧光）。⑶选取肿瘤大小均一，体重相近的荷瘤小鼠50只，随机分组，每组5只小鼠。(1)对照组(C):腹腔注射无菌生理盐水组;(2)单纯超声组:声强分别设定为0.4W/cm2(U1)、0.8W/cm2(U2)、1.6W/cm2(U3);(3)单纯Sonoflora组:浓度分别设定为10mg/kg(S1)、20mg/kg(S2)、40mg/kg(S3);(4)超声+Sonoflora组:Sonoflora浓度定为10 mg/kg，声强分别设定为0.4W/cm2(S1U1)、0.8W/cm2(S1U2)、1.6W/cm2(S1U3)。在暗室内腹腔注射Sonoflora，避光避声饲养，声敏剂注射18h后进行超声处理，超声辐照时间固定为180s。每2天用电子游标卡尺测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。计算肿瘤体积公式:肿瘤体积=π/6[（长径+宽径）/2]3。15天后脱颈处死小鼠，剥离肿瘤组织，电子天平称重，比较瘤体重量。⑷选取肿瘤大小均一，体重相近的荷瘤小鼠140只，随机分4大组:对照组(C);腹腔注射Sonoflora10mg/kg组;20mg/kg组;40mg/kg组。每大组35只荷瘤小鼠，再随机分为7组，每小组5只老鼠。避光避声饲养，并分别于给药后3、6、12、18、24、48、72h，采用摘眼球取血法取血，放入EDTA血常规管，取血液约1.5 ml混匀后在2h内给予送检检验科，检测血红蛋白、红细胞、白细胞、血小板、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、直接胆红素、肌酐、尿素氮、乳酸脱氢酶、磷酸肌酸。⑸统计方法:实验数据以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行分析，两组之间比较采用t检验，多组之间比较采用one-way ANOVA方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：①腹腔注射后3h后，Sonoflora（10mg/kg）在肿瘤组织中含量开始显著高于正常肌肉组织(P＜0.05)，持续至48h。其中18h时Sonoflora在肿瘤和正常肌肉组织含量均达最高峰，且此时差异最明显，肿瘤组织荧光强度是正常肌肉组织的5.33倍。72h后肿瘤及正常肌肉组织荧光均明显减弱甚至消失。鉴于18h肿瘤组织声敏剂含量与正常肌肉含量之比最大，此时若对肿瘤进行辐照处理，既可有效的杀伤肿瘤细胞，又对周围正常组织损伤较小，我们选用这一时间点进行声动力实验。②单独应用超声或Sonoflora对肿瘤生长的影响通过对各组小鼠肿瘤体积的生长趋势及最终肿瘤平均重量的比较可以发现，单纯超声组0.4 W/cm2(U1)、0.8 W/cm2(U2)、1.6 W/cm2(U3)组，单纯Sonoflora10mg/kg(S1)、20mg/kg(S2)、40 mg/kg(S3)组组间比较及与空白对照组(C)对比均无显著性差异(P＞0.05)。提示单独使用超声照射(0.4、0.8、1.6W/cm2)或单独注射Sonoflora(10、20、40 mg/kg)均不能明显有效的抑制肿痛生长。③Sonoflora介导的声动力对S180肉瘤的杀伤作用通过对各组小鼠肿瘤体积的生长趋势及最终肿瘤平均重量的比较可以发现，单纯0.8 W/cm2超声组(U2)、单纯10mg/kg Sonoflora(S1)与空白对照组(C)对比均无显著性差异(P＞0.05)，而0.8 W/cm2超声和10mg/kg Sonoflora联合治疗组(S1U2)其肿瘤体积及重量较单纯超声(U2)、单纯声敏剂(S1)及对照组(C)显著减少(P＜0.05)。提示超声联合Sonoflora(10mg/kg+0.8W/cm12)介导的声动力具有协同抗肿瘤作用。④Sonoflora介导的声动力疗效与超声波的强度关系通过对各组小鼠肿瘤体积的生长趋势及最终肿瘤平均重量的比较可以发现，3组声动力组10mg/kg+0.4 W/cm2(S1U1)、10mg/kg+0.8 W/cm2(S1U2)、10mg/kg+1.6 W/cm2(S1U3)与空白对照组(C)对比均有显著性差异(P＜0.05)，10mg/kg+0.4 W/cm2(S1U1)与10mg/kg+0.8 W/cm2(S1U2)、10mg/kg+1.6 W/cm2(S1U3)对比有显著性差异(P＜0.05)，而10mg/kg+0.8 W/cm2(S1 U2)与10mg/kg+1.6 W/cm2(S1 U3)对比无显著性差异(P＞0.05)。提示Sonoflora浓度为10mg/kg情况下，0.4、0.8、1.6W/cm2强度的介导的声动力均对S180肿瘤生长产生明显抑制作用(P＜0.05)，而固定Sonoflora浓度为10mg/kg情况下，0.8W/cm2强度介导的声动力已达最大抑制肿瘤强度。⑤四组瘤荷瘤小鼠的腹腔注射后不同时间点白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、直接胆红素、乳酸脱氢酶、磷酸肌酸无显著性差异(p＞0.05)。Sonoflora40mg/kg腹腔注射后48h、72h的血肌酐与对照组、20mg/kg、10mg/kg组有显著性差异(p＜0.05);72h的血尿素氮也与对照组、20mg/kg、10mg/kg组有显著性差异(p＜0.05)。提示Sonoflora浓度40mg/kg腹腔注射对荷瘤小鼠肾功有损害作用，导致血肌酐、尿素氮升高。而10mg/kg、20mg/kg浓度的Sonoflora对荷瘤小鼠血常规、肾功、肝功、心功的无损害作用。
结论：⑴在S180荷瘤小鼠中，Sonoflora具有肿瘤靶向性好、体内代谢快的优点;Sonoflora腹腔注射后18h是进行超声处理的理想时间点。⑵在Sonoflora10mg/kg的浓度下，超声联合Sonoflora显著抑制小鼠S180肉瘤生长，且0.8W/cm2强度介导的声动力达最大抑制肿瘤，与1.6 W/cm2无显著性差别(P＞0.05)。⑶10～20mg/kg浓度的Sonoflora腹腔注射S180肉瘤荷瘤小鼠后3h～72h是安全的。
关键词: 恶性肿瘤 ；肿瘤治疗 ；超声疗法 ；声动力学
摘要： 恶性肿瘤是威胁人类生命健康的头号杀手之一,手术、放疗、化疗和靶向治疗是目前恶性肿瘤治疗的主要方法,大部分患者诊断时已是局部晚期或有远处转移,失去手术机会。化疗和放疗在杀伤肿瘤细胞的同时,对正常细胞也不加选择性的造成了严重的损伤,毒副反应较大,许多患者因体质差或无法耐受毒副作用而放弃治疗。靶向治疗虽不良反应小,但其疗效与基因突变相关。因此,寻找其他高效、低毒的恶性肿瘤治疗新方法,是医学界面临的重要问题。
声动力疗法(Sonodynamic therapy, SDT)是在光动力疗法(Photodynamic therapy, PDT)基础上发展起来的一种治疗恶性肿瘤的新理念、新方法。肿瘤患者口服或静脉注射声敏剂,而后用一定频率和强度的超声照射肿瘤部位,通过超声激活聚集在肿瘤部位的声敏剂,使其产生一系列声化学反应(如产生单态氧、自由基),导致肿瘤细胞的不可逆性损伤。与光动力疗法(激光激活光敏剂,产生单态氧或自由基,从而起到杀伤肿瘤的作用)相比,超声对人体组织有很强的无创穿透能力,无需借助其他介入手段即可对深部肿瘤进行治疗,故有着广阔的发展前景。目前SDT存在的主要问题是所用的声敏剂多为血卟啉及其衍生物为代表的第一代光敏剂,肿瘤靶向性不强,排泄缓慢,易发生光毒副反应,影响了SDT疗效及其临床实际应用。因此,寻找靶向性高、毒副作用小的新型声敏剂以及探索最佳的声动力治疗模式是必要的。
Chlorin e6是一种结构类似于血卟啉的叶绿素降解产物,早先被应用于光动力治疗中,显示确切的抗肿瘤作用及肿瘤靶向性强、正常组织清除快、毒副反应低的优点。但是Chlorin e6作为声敏剂应用于声动力治疗恶性肿瘤的研究目前还比较少,我们前期的细胞学研究工作显示Chlorin e6具有在肺癌、乳腺癌等肿瘤细胞特异聚集性和声动力治疗靶向杀伤肿瘤细胞作用,是一个有临床应用前景的声敏剂,但目前缺乏整体动物的肿瘤靶向特异聚集性和声动力作用的实验证据。因此,本研究的第一个目的是采用激光共聚焦显微镜观测Chlorin e6在S180肉瘤荷瘤小鼠肿瘤组织的富集情况。第二个目的是研究Chlorin e6联合超声对S180肉瘤的杀伤作用,探索理想的声动力治疗模式。
第一部分Chlorin e6在S180荷瘤小鼠肿瘤组织和肌肉组织的分布
目的
研究Chlorin e6在肿瘤组织的富集情况,探索给药后最佳的超声辐射时间。
方法
S180肉瘤荷瘤小鼠腹腔注射Chlorin e6(10mg/kg),分别于给药后3、6、12、18、24、48、72h断颈处死小鼠,剥离肿瘤组织和周围肌肉组织,制备冷冻切片,并在激光共聚焦显微镜下测定和观察肿瘤和肌肉组织的荧光强度及荧光显像(显示为红色荧光)。
采用SPSS13.0统计软件进行两个重复测量因素的方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
腹腔注射后24h内,Chlorin e6(10mg/kg)在肿瘤及周围肌肉组织中的含量随时间递增,肿瘤组织含量明显高于周围肌肉组织,18h时达最高峰,且此时肿瘤组织和肌肉组织中的差异最明显,荧光强度相差6.14倍。后随着时间延长荧光逐渐减弱,24h后接近正常,72h后基本检测不到荧光。由此可见Chlorine6(10mg/kg)在腹腔注射后可靶向性富集于肿瘤组织,18h含量达到最高,且此时与正常组织的含量差异最明显。此时若对肿瘤进行辐照处理,既能达到最有效的杀伤肿瘤细胞作用,又对正常组织损伤较小。给药24h后,Chlorin e6在肿瘤及正常组织中含量均很少,72h后基本清除完毕,提示Chlorin e6具有代谢迅速、清除快的特点,可以有效减少对正常组织的毒副作用。
第二部分Chlorin e6声动力对小鼠S180肉瘤生长的作用
目的
研究Chlorin e6联合超声对S180肉瘤的杀伤作用,探索理想的声动力治疗模式。
方法
1、单独超声照射对S180肉瘤生长的作用
S180肉瘤荷瘤小鼠随机分为4组,每组5只小鼠：(1)对照组；(2)单独超声(声强0.4W/cm2)组；(3)单独超声(声强0.8W/cm2)组；(4)单独超声(声强1.6W/cm2)组。超声频率固定为1.0MHz,超声辐照时间固定为180s。
2、单独Chlorin e6腹腔注射对S180肉瘤生长的作用
S180肉瘤荷瘤小鼠随机分为4组,每组5只小鼠：(1)对照组；(2)单独Chlorin e6(剂量10mg/kg)组；(3)单独Chlorin e6(剂量20mg/kg)组；(4)单独Chlorin e6(剂量40mg/kg)组。
3、Chlorin e6介导的声动力治疗对肿瘤的杀伤作用
S180肉瘤荷瘤小鼠随机分为4组,每组5只小鼠：(1)对照组；(2)单独Chlorin e6(剂量40mg/kg)组；(3)单独超声(声强1.6W/cm2)组；(4)Chlorine6+超声组：40mg/kg Chlorin e6+1.6W/cm2超声；Chlorin e6腹腔注射后18h行超声处理,超声频率固定为1.0MHz,超声辐照时间固定为180s。
4、Chlorin e6介导的声动力疗效与超声的强度关系
S180肉瘤荷瘤小鼠随机分为4组,每组5只小鼠：(1)对照组；(2)40mg/kgChlorin e6+0.4W/cm2超声；(3)40mg/kg Chlorin e6+0.8W/cm2超声；(4)40mg/kg
结论
Chlorin e6具有肿瘤组织靶向性好、正常组织清除快的优点。Chlorin e6给药后18h是进行超声处理的理想时间点。Chlorin e6+1.6W/cm2超声。Chlorin e6腹腔注射后18h行超声处理,超声频率固定为1.0MHz,超声辐照时间固定为180s。
5、Chlorin e6介导的声动力与Chlorin e6剂量的关系
S180荷瘤小鼠随机分为4组,每组5只小鼠：(1)对照组；(2)1.6W/cm2超声+10mg/kg Chlorin e6;(3)1.6W/cm2超声+20mg/kg Chlorin e6;(4)1.6W/cm2超声+40mg/kg Chlorin e6。Chlorin e6腹腔注射后18h行超声处理,超声频率固定为1.0MHz,超声辐照时间固定为180s。
每2d测量肿瘤大小,第15d剥离瘤体进行质量比较。实验数据以x±s表示,采用SPSS13.0统计软件进行分析,两组之间比较采用t检验,多组之间比较采用one-way ANOVA方差分析,组间两两比较采用LSD检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
1、单独应用超声波或Chlorin e6对肿瘤生长的影响与对照组相比,单独使用声强为0.4-1.6W/cm2超声照射或单独注射Chlorin e6(剂量为10-40mg/kg)对肿瘤生长无显著影响(P>0.05)。提示在上述超声强度和Chlorin e6(?)(?)量范围内,单独应用超声或Chlorin e6均不能显著有效抑制肿瘤生长。
2、Chlorin e6介导的声动力治疗对S180肉瘤的杀伤作用对照组肿瘤体积随时间逐步增长,单独使用1.6W/cm2超声和40mg/kg Chlorin e6对肿瘤生长无显著影响(P值分别为0.086、0.080),1.6W/cm2超声联合40mg/kg Chlorin e6声动力作用后肿瘤生长显著受抑制(t=30.509,P=-0.000)。提示Chlorin e6联合超声的声动力治疗具显著的协同抗肿瘤作用。
3、Chlorin e6介导的声动力疗效与超声的强度关系与对照组相比,超声+声敏剂Chlorin e6联合治疗(Chlorin e6剂量固定为40mg/kg；超声强度分别设为0.4W/cm2、0.8W/cm2、1.6W/cm2)的3组对S180肉瘤生长产生显著抑制作用(P值分别为0.000、0.000、0.000)。而且在固定Chlorin e6剂量为40mg/kg情况下,超声强度越强,其抑瘤作用越明显,呈强度依赖性,1.6W/cm2强度的超声抑瘤性最强,提示1.6W/cm2可能为声动力治疗的最佳超声强度。
4、Chlorin e6介导的声动力疗效与Chlorin e6剂量的关系与对照组相比,超声+声敏剂Chlorin e6联合治疗(固定超声强度为1.6W/cm2; Chlorin e6剂量分别设为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg)的3组均对S180肉瘤生长产生显著抑制作用(P值分别为0.000、0.000、0.000)。在Chlorine e6剂量为10～40mg/kg范围内,肿瘤的抑制作用随Chlorine e6剂量的增加而增强,呈剂量依赖性,在固定频率1.0MHz,声强1.6W/cm2的超声条件下,40mg/kg Chlorin e6抑瘤性最强,提示该剂量的Chlorin e6可能为声动力治疗的最佳剂量。
结论
单独使用超声照射(0.4～1.6W/cm2)或单独注射Chlorin e6(10～40mg/kg)对小鼠S180肉瘤无显著杀伤作用。Chlorin e6联合超声可显著抑制肿瘤生长,抑瘤率随超声强度(0.4～1.6W/cm2)和Chlorin e6剂量(10～40mg/kg)的增加而增强,且未见光照性皮炎等毒副反应。
关键词: 声动力疗法 ；Chlorin e6 ；S180肉瘤 ；超声波 ；共聚焦显微镜(LSCM) ；声动力疗法 ；Chlorin e6 ；S180肉瘤 ；超声波