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五种药用植物内生真菌的分离纯化及其次生代谢产物生物活性研究认领

作者：

相海娥

学位授予单位：

兰州理工大学

摘要：

近些年来的研究表明，药用植物内生真菌可以产生许多结构新颖的活性次级代谢物，并且已经成为发现新的具有天然活性物质的重要来源。因此，本论文选取五种药用植物作为材料，对其内生真菌、内生真菌次级代谢产物的生物活性以及化学成分等方面进行研究，研究内容和结果如下:　　1、运用组织块法，分别从药用植物荷叶(Nelumbo nucifera)、雷公藤（Tripterygiumwilfordii）、钩藤（Uncaria tomentosa）、止泻木（Holarrhena antidysenterica）和大狼毒(Euphorbia nematocypha)的植物组织中分离得到14株、12株、7株、5株、8株，共计46株内生真菌。对这46株内生真菌的发酵液和菌丝体进行提取，得到了发酵液乙酸乙酯萃取物和菌丝体乙醇提取物。　　2、运用酶标法，对内生真菌粗提物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性的检测。抗单胺氧化酶活性显示，有24种内生真菌提取物具有单胺氧化酶抑制活性，在终浓度为167μg/mL下，抑制率在50％以上，其中有8种的抑制率在80％以上，以GT-7发酵液萃取物的抑酶活性最强，达92.53％。具有单胺氧化酶抑制活性的样品分别占各植物内生真菌总样品数的42.86％、58.33％、42.86％、40％、62.5％。抗乙酰胆碱酯酶活性显示，有2种内生真菌的提取物具有抑制乙酰胆碱酯酶活性，在终浓度为100μ g/mL浓度下，其抑制率在50％以上，其中以ZXM-5发酵液萃取物的抑酶活性最强，达61.81％。　　3、运用多种现代色谱（硅胶柱色谱法，制备薄层色谱法，凝胶色谱，HPLC等）分离技术，对LGT-2、LGT-4、GT-5菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物和LGT-4菌株菌丝体醇提物中的化合物进行分离纯化，并借助1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS、HMBC、HSQC、1H-1HCOSY、NOESY、MS、IR等手段鉴定了23个化合物，分别被鉴定为:citrinin（橘青霉素）(1)、4，6，8(14)，22(23)-tetraen-3-one-ergostane(4，6，8(14)，22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷）(2)、2-Hydroxy-14-tricosenvic acid（2-羟基-14-二十三烯酸）(3)、wortmannin（渥曼青霉素）(4)、wortmannolone(5)、2，4-Dihydroxy-6-((R)-4-hydroxy-2-oxopentyl)-3-Methylbenzaldehyde(6)、(+)-BrefeldinA（布雷菲德菌素A，BFA）(7)、(22E，24R)-Ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(8)、 epoxyvirone(9)、 secovironolide(10)、11-desacetoxywortmannin(11)、 ergosta-7,22-dien-3β,5α,6α-triol(cerevisterol)(12)、3-dihydrovirone(13)、11-desacotoxywortmannin(14)、deacetylisowortmin(15)、ergosterol（麦角甾醇）(16)、Campesterol(17)、Phenylalanine（苯丙氨酸）(18)、Physcion（大黄素甲醚）(19)、Chrysophanol（大黄酚）(20)、Rhein（大黄酸）、(21)、ergosterol peroxide（麦角甾醇过氧化物）(22)、Flufuran(23)。以上化合物中，化合物9、10为新化合物，其中10为virone类呋喃甾体在B环发生裂环重排后得到的一个新骨架化合物。　　4、对分离出来的23个化合物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性检测，结果表明，化合物4、10、23显示了中等强度的单胺氧化酶抑制活性，在终浓度167μg/mL时其抑制率分别为78.40％、83.55％、88.67％，其IC50值分别为91.22μg/mL、40.17μg/mL、29.19μg/mL。化合物1显示了中等强度的乙酰胆碱酯酶抑制活性，在终浓度167μg/mL时其抑制率为56.37％，IC50值为147.74μg/mL。　　5、运用分子生物学手段，对菌株LGT-2、LGT-4和菌株GT-5的ITS区序列分析，在Blast上与其同源性较高的ITS rDNA序列进行比对，通过聚类分析，并结合菌落形态颜色及菌丝体、分生孢子梗的观察，鉴定菌株LGT-2和GT-5均为曲霉属(Aspergillussp.)真菌，菌株LGT-4为裸节菌属（Talaromyces sp.）真菌。将菌株ITS序列提交到NCBI（The National Center for Biotechnology Information）数据库并收录，菌株LGT-2、LGT-4、GT-5收录序列号分别为KF934203、 KF850714、KF934202。

摘要译文

关键词：

内生真菌; 次级代谢产物; 分子生物学鉴定; 生物活性; 药用植物; 分离纯化

学位年度：

2014

学位类型：

硕士

学科专业：

微生物学与生化药学

导师：

杨中铎

中图分类号：

R284[中药化学]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100804[中药化学]

D O I：

10.7666/d.Y2567037