微生物次级代谢产物是现代药物发现的重要来源,从各种微生物中获取天然的先导化合物是微生物药物筛选的重点。随着普通环境放线菌,尤其是链霉菌中发现新化合物的几率越来越低,极端环境微生物代谢物的研究已经成为药物筛选的又一热点。本文选取一株采自新疆盐湖的嗜盐放线菌新属种YIM90002<'T>作为材料,对其次级代谢产物进行了初步研究。
利用实验室前期工作中对该菌培养基成分的研究,我们选择甘油和酵母膏作为主要因素进行了中心组合实验设计,以发酵液乙醇提取物干重为指标进行响应面分析,得到两个因素的最优水平为:甘油1.7258%、酵母膏0.8112%,使培养基成分得到进一步的优化。利用优化的培养基配方,采用冷轧大豆粉为原料进行了30L摇瓶发酵;又采用生大豆粉为原料进行了30L发酵罐的液体发酵,为化合物的分离纯化提供了初始材料。
通过对两批发酵获得的发酵产物进行预处理,共获得了4个粗提物,分别为:F90002-SE(9.56g)、F90002-SM(7.15g)、F90002-OE(10.14g)、F90002-OM(17.28)。对粗提物的量、TLC情况进行考察,发现采用生大豆粉罐发酵菌丝体提取物量比采用冷轧大豆粉摇瓶发酵更大,且采用生大豆粉获得的代谢产物更加丰富。然后在TLC的指导下,对粗提物中的各个组分进行了分离纯化,通过凝胶柱层析、硅胶柱层析、HPLC制备等方法共得到10个化合物。经过结构解析,确定了其中9个化合物的结构。
最后,选用6种病原菌模型对所得化合物进行了抗菌活性的测定。发现YAN-03对藤黄微球菌有抑制活性以及YAN-06对藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌有抑制活性。
近年来,对极端嗜盐微生物的应用研究主要集中在嗜盐酶方面,对其次生代谢产物的研究除少数海洋放线菌外几乎为空白。本文的创新之处就在于细致研究了一株嗜盐放线菌的次生代谢产物化学多样性及生物活性,且新种所具有的独特基因也为我们发现新颖的次级代谢产物创造了条件。 摘要译文
薄层层析; 生物活性; 放线菌; 嗜盐微生物; 次生代谢产物; 化学多样性