目的:采用现代质谱技术,对来源于不同产地人参中的化学成分进行系统的定性与定量分析,考察生长环境、生长年限等因素对人参成分的影响,进一步探究道地产区以及非道地产区人参质量的差异。旨在通过的化学成分的研究,为人参药材综合质量评价体系的建立提供参考。 方法:采用UPLC-TOF-MS/MS及UPLC-MRM-MS/MS技术对来自全国5个地区(辽宁,吉林,黑龙江,湖北,云南)的多种人参进行成分分析,并结合多元统计方法评价不同产区药材优劣。 (1)采用63种现存的人参皂苷作为对照品,人参皂苷Re3(1),人参皂苷20-glu-Rf(2),人参皂苷Re4(3),人参皂苷Re2(4),三七皂苷R1(5),人参皂苷Re1(6),人参皂苷Rg1(7),人参皂苷Re(8),人参皂苷Ro(9),CS-Ⅳ(10),CS-Iva(11),三七皂苷R4(12),20(S)-人参皂苷Rf-1a(13),20(S)-人参皂苷Rf(14),20(R)-人参皂苷Rf(15),20(S)-三七皂苷R2(16),人参皂苷F3(17),人参皂苷Ra2(18),人参皂苷Ra3(19),20(R)-三七皂苷R2(20),人参皂苷Rb1(21),20(S)-人参皂苷Rg2(22),20(R)-人参皂苷Rg2(23),人参皂苷Ra1(24),人参皂苷Rc(25),20(S)-人参皂苷Rh1(26),20(R)-人参皂苷Rh1(27),人参皂苷Rb2(28),人参皂苷Rb3(29),Q-R1(30),人参皂苷Rd(31),人参皂苷Rk1(32),人参皂苷Rs2(33),人参皂苷Rs1(34),人参皂苷Ro甲酯(35),人参皂苷Rh19(36),DHDGG(37),人参皂苷Rg6(38),人参皂苷F4(39),DHDXG(40),CS-Iva甲酯(41),人参皂苷Rk3(42),人参皂苷Rh4(43),人参皂苷Rg9(44),人参皂苷F2(45),20(S)-人参皂苷Rg3(46),20(R)-人参皂苷Rg3(47),DEDT(48),20(S)-PPT(49),20(R)-PPT(50),20(S)-人参皂苷Rs3(51),20(R)-人参皂苷Rs3(52),人参皂苷Rs4(53),ZB-RI-6''甲酯(54),人参皂苷Rg5(55),人参皂苷K(56),20(S)-人参皂苷Rh2(57),20(R)-人参皂苷Rh2(58),DDT(59),20(S)-PPD(62)以及20(R)-PPD(63),对来源于集安的15年生的林下参,5年生的林下参,5年的生园参,5年生的农田参进行定性分析。采用Peakview1.2软件分析解析化合物,同时,运用网站Sci-Finder查询推测的化合物是否为潜在的新型人参皂苷化合物。采用代谢组学的方法处理质谱数据,利用多元统计分析技术如聚类分析、OPLS-DA分析、热图分析、韦恩图分析等,比较不同生长环境下人参中人参皂苷种类差异。 采用上述方法,对我国道地产区(吉林省抚松县)以及非道地产区(黑龙江省铁力县)两个主产区的5年生的农田参进行定性分析处理,研究两个不同生长环境下,两个主要产区的人参在皂苷成分方面的差异。 (2)采用(1)中方法对道地产区与非道地产区的5年生的园参和农田参进行定性分析。 (3)采用41种人参皂苷作为对照品,利用岛津LCMS-8050超高效液相色谱-质谱仪对5个主要产区198批次的生晒参样品进行定量分析,样品粉碎,比较不同生长环境,生长年限的人参中人参皂苷含量差异,并运用多元统计分析的方法进行成分比较。 结果:首先,在不同人参样品中共鉴定出包括63种人参皂苷标准品在内的571种人参皂苷,其中新型人参皂苷191种。统计分析结果表明,来自于相同地域但生长环境和生长年限不同的人参,人参皂苷种类具有明显的差异。就人参皂苷数量而言,15年生的林下参大于5年生的林下参,这表明生长年限可影响人参药材的质量;而5年生的园参多于5年生的农田参,这表明生长环境同样影响人参药材质量;道地产区的5年生的园参和农田参分别多于非道地产区的5年生的园参,农田参,这表明在化学成分方面,道地产区人参较非道地产区人参更加优异,印证了大力发展道地产区药材的重要性与必要性。 定量结果表明,不同产区、不同生长年限的人参中皂苷类成分差异较大。以样品中定量的41种人参皂苷对照品含量之和为总皂苷进行多元统计分析,道地产区中15年生的林下参中皂苷成分较5年生的林下参更高,园参较农田参更高。与非道地产区对比,道地产区同类型人参更为优质。以上结果再一次印证了环境对人参中化学成分的影响以及道地产区较非道地产区的优势。 结论:本课题针对来源于全国不同产区的人参药材建立了一种新的定性与定量相结合的,同时分离测定多种皂苷类化合物的液质联用技术,为快速鉴定与检测人参中皂苷类化合物提供了新的分析技术。本课题采用色谱分析与代谢组学方法相结合的模式,为开展中药材质量分析提供了新的研究思路与方法。 摘要译文