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五味子抗副溶血弧菌活性物质的提取鉴定及应用研究认领

作者：

张宗艺

学位授予单位：

江苏海洋大学

摘要：

随着水产品污染日益严重，食用受污染的水产品所带来的食源性疾病也日益增多，其中最严重的是副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）感染，这种疾病可能会导致严重的胃肠炎，甚至危及生命安全。常见的物理及化学抑菌剂虽然能对水产品起到很好的抑菌作用，但使用不当依旧会对食品造成食品安全问题，也会影响人类健康。因此寻找绿色、无毒害且高效的天然抑菌剂显得尤为重要。本实验基于此背景下，对中草药五味子（WuWeiZi）进行抗副溶血弧菌活性物质（WWZE）的提取工艺优化、鉴定其活性成分、探究其抗生物膜的活性和作用机理以及测定其抗氧化活性，最后通过壳聚糖/WWZE制成的保鲜剂研究其对冷藏海鲈鱼片品质的影响。研究结果如下：　　（1）采用单因素实验、Box-Behnken（BBD）试验设计以及响应面分析法，确定了WWZE的最佳优化提取工艺：乙醇浓度69%，提取温度91℃，提取时间143min，料液比20mL/g;最优条件下WWZE对副溶血弧菌的抑菌圈平均值为15.67±0.13mm(n=3)，与预测值无显著性差异，得率为24.53±0.67%(n=3)。　　（2）采用高效液相色谱法（HPLC）鉴定出WWZE样品含有多种木脂类化学成分，例如五味子醇甲、醇乙、酯甲、酚、甲素、乙素以及丙素，保留时间（tR）分别为：20.253、24.063、28.348、30.792、35.679、41.913和44.459min，其含量分别为2.59、0.746、1.55、0.129、1.157、2.34和0.614mg/g。采用微量肉汤稀释法测定五味子酯甲、五味子醇乙和WWZE对副溶血弧菌的最小抑菌浓度（MIC）分别为1.25、0.625和1.25mg/mL，而其他五个化合物的MIC均大于2.5mg/mL，表明五味子酯甲和五味子醇乙是五味子提取物的主要抗菌活性成分。　　（3）采用结晶紫染色、考马斯亮蓝染色、刚果红平板、分光光度和CCK-8等方法探究了WWZE对副溶血性弧菌生物被膜的活性和作用机理，结果表明WWZE能够通过显著破坏副溶血性弧菌细胞膜完整性、抑制细胞间多糖黏附素（PIA）的合成和胞外DNA的分泌以及降低生物膜的代谢活性，从而发挥其剂量依赖型的有效抑制副溶血弧菌生物被膜的形成和清除成熟生物被膜的潜能，MIC的WWZE对副溶血弧菌生物被膜形成的抑制率和成熟生物被膜的清除率分别为67.69%和34.17%。　　（4）通过对WWZE的DPPH自由基清除活性、羟基自由基清除率、还原能力以及总抗氧化力的测定来探究WWZE的抗氧化活性。结果表明，WWZE在不同浓度下都可以清除DPPH自由基和羟基自由基，并且在提供足够的水平时，它的还原能力会更强。这说明WWZE在抵御自由基方面的作用非常强，特别是在MIC的情况下对DPPH和羟基自由基清除率分别为56.26%、92.02%。　　（5）通过在冷藏条件下壳聚糖/WWZE制成的保鲜剂对海鲈鱼片的pH值、总挥发性盐基氮（TVB-N）、菌落总数（TVC）、脂肪氧化（TBA）和感官评价进行定期分析。结果表明，与对照组处理相比，壳聚糖/WWZE制成的保鲜剂处理的海鲈鱼片在pH值、TVB-N含量、TVC、TBA值和感官评价的升高速率下降，在（4±1）℃下完好保存11天，货架期延长了4~5天，说明五味子提取物在食品保鲜领域具有一定的应用价值。

摘要译文

关键词：

五味子; 副溶血弧菌; 抗菌活性; 提取优化; 保鲜剂; 化学成分

学位年度：

2023

学位类型：

硕士

学科专业：

食品加工与安全

导师：

郭雷

中图分类号：

R284.1[化学分析与鉴定]

学科分类号：

1005[中医学];100803[中药鉴定学];100804[中药化学];100805[中药分析学]