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清络方药效成分定性定量分析及血清药物化学初步研究认领

被引量： 14

作者：

杨帅

学位授予单位：

中国协和医科大学

摘要：

中药复方是中医辨证论治、整体观思维的具体表现,它是一组具有化学成分非常复杂、干扰因素众多等特点的典型复杂体系。中药复方通过君臣佐使各味药材之间的配伍组合,针对疾病的病因病机,通过适当的给药途径被吸收入血,整体协同互济达到治疗疾病的目的,所以对中药复方的体内外物质基础研究也应从其整体入手。中药复方药效物质基础研究是中药现代化的核心问题之一。对复方化学成分的研究有可能从本质上阐明复方作用的物质基础,可为优化处方,制定科学的制剂工艺,提高制剂质量提供依据。清络方是类风湿性关节炎湿热阻络证的代表方剂,为揭示清络方的药效物质基础,研究药物体内变化规律,提高整方的质量控制手段,本论文采用HPLC-DAD. HPLC-DAD-MS／MS等多种成熟的分析技术研究并阐明了清络方主要的药效物质基础,运用正常及病理状态大鼠血清药物化学的分析手段研究了清络方主要的体内作用物质基础。在体内外物质基础明确的基础上,对清络方的主要成分进行质量控制研究。具体研究思路如下所示：第一部分文献综述总结了清络方的临床应用和现代研究,并对清络方复方的三个单味药苦参、青风藤、黄柏进行了简介,对清络方中主要的化学成分进行了综述。共引用参考文献56篇。第二部分清络方中化学成分定性研究首先建立了清络方全方液质联用的分析方法,采用HPLC-DAD-MS／MS技术对清络方复方中检测到的主要化合物进行了分析,共推测鉴定了包括木兰碱、氧化苦参碱、青藤碱、苦参碱、小檗碱等14个主要的生物碱类化合物及2个未知物。已推测并鉴定的生物碱类别主要包括氮杂环已烷类生物碱(苦参碱类)、氮杂环已烷类生物碱(无叶豆碱类)、.高苄基四氢异喹啉生物碱(四氢原小檗碱类)、阿朴啡型生物碱(阿朴啡季胺盐类)、四氢异喹啉生物碱(原阿朴啡类)。HPLC-DAD-MS／MS分析条件的建立及主要化合物的分析鉴定,为下一步血清药物化学研究及主要成分定量研究奠定了基础。第三部分清络方正常大鼠及病理大鼠入血成分初步研究在已建立的HPLC-DAD-MS／MS分析方法的基础上,本实验通过动物造模、血清前处理及部分色谱条件的优化,建立了清络方血清药物化学分析方法。运用HPLC-DAD-MS／MS方法对清络方全方提取液、正常大鼠及病理大鼠给药血清和空白血清进行对比分析。从正常大鼠含药血清中共检测到13个主要色谱峰,鉴定了其中的7个原型入血成分及三种主要类型的代谢产物。从病理大鼠含药血清中共检测到14个主要色谱峰,鉴定了其中的7个原型入血成分及三种主要类型的代谢产物。正常大鼠及病理大鼠血清中均可检测到的以原型入血的化学成分主要包括木兰碱、羽扇豆碱、苦参碱、青藤碱、槐果碱、小檗碱及一种结构未知的苦参碱类化合物。正常大鼠与模型大鼠的代谢产物主要包括羟基氧化代谢产物、葡萄糖醛酸结合产物及一种未知类型的代谢产物三个主要类别。在这些入血成分中,大部分化合物都已经证明对类风湿关节炎有相关的治疗作用。本部分最后,分析比较了正常大鼠与病理大鼠清络方入血成分的区别,正常大鼠及病理大鼠对清络方中部分原型成分的吸收及对部分化合物的代谢能力存在一定的差别。清络方血清药物化学的研究初步明确了清络方的体内作用的药效物质基础。第四部分清络方中的主要药效成分的定量研究本部分根据上述分析的研究结果,采用HPLC-DAD联用技术对清络方中8个主要成分(其中包括5个主要的入血成分)进行了定量研究。通过对多个主要药效成分的同时定量测定,不仅可以提高清络方的质量标准,而且使该复方的稳定性得到了有力的保障. 本课题采用液相色谱/电喷雾质谱联用技术等多种分析方法,通过对清络方全方物质基础、正常及病理状态大鼠的入血成分的研究及主要作用成分的定量研究,基本阐明了清络方的体内外作用的物质基础,并为质量控制提供了稳定可靠的方法。清络方药效物质基础的阐明,为进一步揭示复方多成分多靶点的作用机制提供了理论依据。本方法简便、准确、快速,重复性好,实现了中药复方全方定性、指标性成分定量,血清成分定性的原则,能够为清络方的指纹图谱质量控制以及血清药物化学的血清指纹图谱进一步研究打下基础,对临床用药和进一步开发利用提供了依据,为实现中药现代化进行了有价值的研究。

摘要译文

关键词：

清络方; 定性; 定量; 血清药物化学; HPLC-DAD-MS/MS

学位年度：

2010

学位类型：

硕士

学科专业：

生药学

导师：

石钺

中图分类号：

R285.5[中药实验药理]

学科分类号：

100505[临床中药学];100805[中药分析学];100806[中药药理学];100808[临床中药学]

D O I：

10.7666/d.Y1775692