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BCB染色法筛选牛卵母细胞的初探认领

被引量： 2

作者：

曹泽磊

学位授予单位：

西北农林科技大学

摘要：

亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue BCB)是一种生物染料,它可以和卵母细胞中的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6DPH)作用而不显色。这种酶在生长中的卵母细胞中含量比较大,随着卵母细胞的生长接近完成,这种物质也逐渐减少,乃至消失。生长期的卵母细胞中含有G6DPH,可以和亮甲酚蓝发生反应而不使卵母细胞着色,而生长完成的卵母细胞中G6DPH很少或接近没有,因此卵母细胞被BCB染成蓝色。被BCB染成蓝色的卵母细胞经体外成熟培养后,具有更好的发育潜能。因此可以通过BCB染色来选择着色的卵母细胞作受体细胞以此来提高核移植的效率。基于此,进行了以下研究: 1.研究BCB不同浓度与处理时间对成熟前卵母细胞着色率及成熟率的影响。结果表明,用26、39与52μmol/L的BCB染色后着色率(BCB+着蓝色)(58.5 %、60.3 %、61.4%)显著高于13μmol/L组(9.1%,P<0.05),但各组间BCB+的成熟率差异不显著(P>0.05),并且各染色组与对照组卵母细胞的成熟率差异不显著(P>0.05)。用26μmol/L的BCB染色90 min后所得到的着色率(59.3%)显著高于染色60、30 min的着色率(42.6%,26.5%,P<0.05),但处理时间延长至120min,着色率(60.2%)并没有得到明显的提高。 2.研究BCB染色对体外受精(IVM-IVF)的影响。本试验以未进行染色处理的牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)作为对照组,并设置处理对照组(在含有0.5%FBS的D-PBS中放置90 min再放入成熟液),在成熟培养前用26μmol/L BCB染色90 min作为处理组,将处理组依照胞质的颜色分为蓝色组(BCB+)和无色组(BCB-)。成熟培养后进行体外受精,授精后48 h统计卵裂率,7～8 d后检查囊胚率。结果表明: (1)染色后着色的卵母细胞成熟率(74%)与对照组(71.6%)和无色组(53.4%)差异显著(P<0.05) ; (2) IVF后蓝色组囊胚率(34.1%)较对照组(26.4%),控制对照组(24%)和无色组(8.7%)差异显著(P < 0. 05)。 3.亮甲酚蓝染色法提高核移植囊胚率。将采集的COCs分成三组,对照组:采集后COCs的直接放入成熟液培养,不用BCB处理;处理对照组:COCs于含有0.5%的FBS的D-PBS中90 min后放入成熟液中培养;试验组:将采集的COCs在含有26μmol/L BCB的D-PBS中放置90 min。然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组:BCB﹢(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞)。各组卵母细胞24小时体外成熟培养。分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数。结果表明BCB+组的囊胚率(41.9%)较对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和9.6%)差异显著(P<0.05)。另外BCB+组的囊胚细胞核数(114.5±7.5)较其它组较高,且差异显著(P<0.05)。经囊胚细胞凋亡检测后发现BCB+组的囊胚细胞凋亡率(16.9%)虽显著低于BCB-组(35.9%),但仍高于对照组(10.4%)和控制对照组(8.5%)。

摘要译文

关键词：

牛; 亮甲酚蓝; 筛选; 卵母细胞

学位年度：

2009

学位类型：

硕士

学科专业：

临床兽医学

导师：

张涌

中图分类号：

Q813[细胞工程];S823[牛⑨]

学科分类号：

071013[干细胞生物学];0905[畜牧学]