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依泽替米贝通过减少SR-BI表达抑制RAW264.7细胞摄取oxLDL 认领

被引量： 1

作者：

袁皓瑜

学位授予单位：

南华大学

摘要：

目的:研究肠道胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝抑制巨噬细胞摄取脂质的作用及可能机制。方法:采用油红O染色、DiI-oxLDL荧光示踪法检测细胞内脂滴数量和细胞摄取脂质含量。采用Western blotting对尼曼-匹克C1型类似蛋白1 (Niemann-Pick type C1 Like-1, NPC1L1)和清道夫受体B族I型(Scavenger receptor class B type I, SR-BI)进行定性和半定量检测;采用Reverse-transcription PCR法检测SR-BI及SREBP-1的mRNA表达。结果: RAW264.7细胞中存在NPC1L1蛋白表达。不同浓度(3, 10和30μM)依泽替米贝(ezetimibe)预先孵育RAW264.7细胞24小时或最佳浓度(30μM)预先孵育不同时间(0, 6, 12和24h)后,换50mg/L oxLDL或DiI-oxLDL继续孵育24小时,结果显示ezetimibe预先孵育组呈浓度依赖性减少脂质蓄积,其中30μM ezetimibe预先孵育24小时组作用最明显,CE百分比相比oxLDL孵育组约减少了47%+0.1%;ezetimibe呈时间依赖性抑制细胞摄取脂质:30μM ezetimibe预先孵育24小时组摄取DiI-oxLDL量较DiI-oxLDL单独孵育组减少约59%+4.5%。ezetimibe预先孵育组能够呈浓度依赖性和时间依赖性减少RAW264.7荷脂细胞中SR-BI蛋白和mRNA表达,较未孵育组分别减少12%+1.5%和80%+6.3%,较oxLDL孵育组分别增加约10%+4.8%和42%+5.3%;同时,ezetimibe预先孵育组能够浓度依赖性和时间依赖性减少RAW264.7荷脂细胞中SREBP-1 mRNA表达,较未孵育组分别减少约18%+0.8%,较oxLDL孵育组分别减少约22%+2.7%。Ezetimibe单独孵育细胞24小时,30μM ezetimibe组相比未孵育组的NPC1L1和SR-BI蛋白表达分别减少约23%+6.2%和15%+2.8%。SR-BI抑制剂非诺贝特预先孵育细胞24小时后换30μM ezetimibe继续孵育24小时,虽然两者联用也能减少SR-BI表达,但无叠加性作用(additive effects),与非诺贝特单独孵育组比较无明显差异(P>0.05),但两种药物联用孵育组的DiI-oxLDL摄取量较ezetimibe单独孵育组和fenofibrate单独孵育组分别减少约6.6%+0.3%和8.6%+3.8%。SREBP-1抑制剂油酸预先孵育细胞24小时后换30μM ezetimibe继续孵育24小时,发现对SREBP-1的mRNA表达也有减少作用,相比油酸单独孵育组无显著性差异,但仍然多于ezetimibe处理组。结论:1.小鼠源性巨噬细胞RAW264.7中存在NPC1L1蛋白表达; 2.依泽替米贝能够减少RAW264.7细胞中脂质蓄积; 3.依泽替米贝通过降低SREBP-1表达进而减少SR-BI表达并最终抑制RAW264.7细胞摄取oxLDL。

摘要译文

关键词：

依泽替米贝; 清道夫受体B族I型; 固醇调节元件结合蛋白1; 巨噬细胞; 胆固醇

学位年度：

2008

学位类型：

硕士

学科专业：

药理学

导师：

庹勤慧

中图分类号：

R96[药理学]

学科分类号：

100109[医学药理学];100603[中西医结合药学];100706[药理学]