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人肝癌细胞GnRH及其受体的研究认领

作者：

刘庆元

学位授予单位：

中国人民解放军第四军医大学

摘要：

我国属肝癌高发区，由于肝癌恶性程度高，目前仍是严重威胁人类生命的主要疾病之一。在肝癌的多种治疗方案中，外科手术切除癌肿仍然为最佳选择；但大多数肝癌患者在确诊时已属中晚期，从而丧失了手术机会。作为保守治疗的化疗和放疗的效果甚微、且毒副作用大。为此人们一直在努力寻找对肝癌高效无毒的治疗手段。近年来肿瘤的内分泌治疗(或称激素治疗)作为一种高效低毒的治疗方法，已引起众多肿瘤病理学家和临床工作者的重视。促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)是由下丘脑神经元分泌的一种含有十个氨基酸的肽类激素，经下丘脑-垂体-门脉系统进入垂体前叶，作用于垂体前叶的促性腺激素分泌细胞，刺激卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone，LH)的分泌，从而调节性腺的发育与配子的形成。已有大量证据表明，GnRH及其受体可广泛存在于下丘脑-垂体轴之外，如免疫系统(T、B淋巴细胞)、生殖系统(卵巢、输卵管、前列腺、睾丸及胎盘等处)以及一些恶性肿瘤(乳腺癌、肺癌、胰腺癌及肝癌等)，对这些组织和器官及恶性肿瘤的生长起调控作用。实验研究和临床观察均提示肝癌可能是一种激素依赖性肿瘤。文献报道体外培养人肝癌细胞上有GnRH受体，天然的GnRH对该细胞系的生长有抑制作用。为进一步探讨GnRH及其受体与肝癌细胞相关生物学特性的关系，我们进行了以下研究： [1]首先对人肝癌细胞株SMMC-7721进行了体外培养，并采用免疫细胞化学、原位杂交技术在培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内检测GnRH及其受体的表达；[2]GnRH类似物对体外培养的人肝癌细胞处理后，分别采用MTT法、琼脂糖凝胶电泳、形态学透射电镜观察和末端脱氧核苷酸 —— 标记法等技术观察细胞的形态学和生化等指标的变化；pj运用放射免疫分析法检测了GnRH类似物对人肝癌细胞PKC酶活性的影响，以探讨人肝癌细胞内GnRH受体介导的信号转导机制；主要研究结果如下： 1．运用免疫细胞化学和原位杂交的方法发现，培养的人肝癌细胞含有GnRH及其受体免疫反应阳性物质，同样含有GnRH受体mRNA杂交信号，二者均位于细胞浆内，胞核为阴性，说明培养的人肝癌细胞能表达 GnRH受体，是GnRH作用的靶细胞。这提示人肝癌细胞可自身合成和分泌 GnRH；在人肝癌细胞中 GnRH可能以自分泌的方式调节肿瘤细胞的功能。 2．MTT法研究结果表明阿拉瑞林在10－’moVL浓度时即可诱导7721 细胞凋亡，并呈量一效效应。透射电镜下可观察到早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞以及核染色质浓缩并见凋亡小体。末端脱氧核苦酸转移标记法进一步证实阿拉瑞林可以诱导肝癌细胞凋亡并可见凋亡小体；与对照组相比，阿拉瑞林处理后 TUNEL凋亡指数显著增加（0．29士 0．06 VS 0．11士 0．03， RO．05）。说明GnRH类似物有明显抑制人肝癌细胞的增殖作用，其作用途径可能是通过肿瘤细胞自身GnRH受体的直接介导而实现的。 3．我们对GnRHR的信号转导分子进行了研究，运用放射性同位素的方法检测了GnRH类似物对SMMC－7721细胞PKC酶活性的影响，发现 GnRH类似物刺激肝癌细胞后，PKC活性的变化显示明显的时间和剂量依赖性，其活性高峰出现在30mh。综上所述，本研究在体外培养的人肝癌细胞中发现有GnRH及其受体的存在，提示体外培养人肝癌细胞可自身合成和分泌GnRH，在人肝癌细胞中GnRH可能以自分泌的方式调节肿瘤细胞的功能；证明了GnRH类似物对人肝癌细胞的增殖有明显的抑制作用，并初步研究了这些功能影响的信号转导机制，PKC”参与了这些功能影响的信号转导途径。

摘要译文

关键词：

肝癌; 促性腺激素释放激素; 凋亡; 信号转导

学位年度：

2003

学位类型：

硕士

学科专业：

外科学

导师：

窦科峰

中图分类号：

R735.7[肝肿瘤⑨]

学科分类号：

1002[临床医学]