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GnRH类似物对体外培养肝癌细胞Fas/FasL基因表达的影响认领

作者：

袁彪

学位授予单位：

中国人民解放军第四军医大学

摘要：

我国属肝癌高发区，由于肝癌恶性程度高，目前仍是严重威胁人类生命的主要疾病之一。原发性肝癌或称肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，由于大多数肝癌患者在就诊时已属中晚期，因而丧失了手术机会。而化疗和放疗等综合治疗的效果并不满意，因此迫切需要找到一种更加高效、安全的治疗方法。近年来肿瘤的内分泌治疗作为一种高效低毒的治疗方法，已引起众多肿瘤病理学家和临床工作者的重视。促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)是由下丘脑神经元分泌的一种含有十个氨基酸的肽类激素，经下丘脑-垂体-门脉系统进入垂体前叶，作用于垂体前叶的促性腺激素分泌细胞，刺激卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone，LH)的分泌，从而调节性腺的发育与配子的形成。已有大量证据表明，乳腺、前列腺、卵巢、垂体第四军医大学硕士学位论文和胰腺肿瘤细胞上存在GnRH结合位点，GnRH类似物可抑制这些肿瘤细胞的生长。实验研究还发现，GnRH的肿瘤抑制效应是不依赖于垂体促性腺激素释放的独立机制实现的。已有研究表明，肝癌细胞上存在Gll．ca－－－－结合位点，GnRH类似物在体外可抑制肝癌细胞的生长，但其具体机制仍不明了，有推测认为是通过增加细胞的凋亡导致的。实验研究和临床观察均提示肝癌可能是一种激素依赖性肿瘤。己有文献报道体外培养人肝癌细胞上有GnRH受体，天然的GnRH对肝癌细胞的生长有抑制作用。 Fas又称APO4，现命名为CD95，是两个研究组于1989年在各自的实验室发现的。Fas属于肿瘤坏死因子（’I’NF）受体和神经生长因子（NGF）受体家族。而 FasL是 Fas在人体内的天然配体 1994 年Suda等利用亲和层析技术从鼠细胞毒性T淋巴细胞中纯化发现的。Fas是细胞凋亡的信号分子，表达Fas的细胞在与Fas抗体或自然存在的FasL以三聚体形成结合后，可活化并传导凋亡信号，触发 Fas所在靶细胞数小时内凋亡。目前研究表明，Fas与FasL在肿瘤发生、发展及转移中有重要作用。为进一步探讨GnRH及其受体与肝癌细胞、Fas／FasL与肝癌细胞相关生物学特性的关系，我们进行了以下研究：①用免疫组织化学方法检测 SMMC772肝癌细胞中 GnRH及其受体的表达，以证实SMMC刀21肝癌细胞为G nRHnRH－R阳性细胞；②采用兔疫组织化学SABC法，检测Fas／FasL在SMMC7721肝癌细胞的表达，为进一步探讨Fas／FasL系统对肿瘤细胞生长的调控作用提供形态学依据；③利用半定量 RTPCR技术（QRTPCR ），检测不同浓度 GnRH类似物刺激下 SMMC772肝癌细胞中 Fas／FasL－InRNA表达水平变化。上述研究对揭示GnRH对肝癌细胞增殖阻抑作用的部 4 第四军医大学硕士学位论文分机理以及GnRH－R介导的肝癌细胞信号传导的部分通路，为深入研究GnRH类似物在治疗肿瘤中的作用提供理论依据。主要研究结果如下： 1．本实验通过免疫组织化学的方法检测到 SMMC7721 中有 GnRH受体蛋白的表达，SMMC772肝癌细胞中 GnRH及其受体蛋白均呈黄褐色颗粒定位于胞浆和胞膜，胞核为阴性。这说明 SMMC772肝癌细胞为 GnRH受体细胞，GnRH可能以自分泌的方式调节肝癌细胞的生长和分化。 2．免疫组化染色后 SMMC772肝癌细胞呈 Fas受体免疫反应阳性，阳性物质定位于胞质，胞核为阴性反应；同样 SMMC772 肝癌细胞亦呈FasL免疫反应阳性，阳性信号位于胞质，胞核未见阳性信号。这提示Fas可能参与了肝癌细胞生长的调节，肝癌细胞的凋亡存在自我调控机制。 3．在GnRH类似物阿拉瑞林的刺激下，随着浓度的增加， SMMC7721肝癌细胞的Fas／FasLmRNA表达水平逐渐增加，显示 GnAN可通过与肝癌细胞表面的Gll．－－－－－ra受体相互作用，利用GnRH 受体介导的信号传导途径诱导肝癌细胞增加 Fas／FasL系统的表达，从而促进肝癌细胞的凋亡，达到抑制肝癌细胞增殖的作用。本研究用形态学方法发现人肝癌细胞系 SMMC7721细胞具有自分泌GnRH 的功能；FaS／FaSL系统参与了Gll．－－－－－ra类似物对 SMMC77 ZI肝癌细胞生长的抑制作用。该实验为 GnRH类似物用于肝癌的内分泌治疗提供了依据。

摘要译文

学位年度：

2003

学位类型：

硕士

学科专业：

人体解剖与组织胚胎学

导师：

张远强

中图分类号：

R735.7[肝肿瘤⑨]

学科分类号：

1002[临床医学]