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基于碳点介导的免疫分析检测黄曲霉毒素B1的方法研究认领

作者：

徐蝶

学位授予单位：

长江大学

摘要：

黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢物,具有极大的危害。它广泛存在于食品、饲料成分、农产品和各种有机物质中,已分离和鉴定出10多种类型。其中,黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）毒性最大,导致大量食品和农产品污染,给人类生产和健康生活造成巨大损失。由于致突变性、致畸性和致癌性,AFB1被国际癌症研究机构（IARC）列为I类致癌物,严重威胁动物和人类健康。因此开发操作简便、灵敏度高的AFB1检测方法具有重要意义。碳点（CDs）是一类新型碳纳米材料,具有高水溶性、低成本、低毒、优良的生物相容性等优点,所以本文以CDs作为荧光探针引入免疫检测分析,在建立AFB1的间接竞争酶联免疫检测方法（ic-ELISA）后,在ic-ELISA的基础上结合CDs构建AFB1检测的新型免疫检测方法,具体内容如下: 1.AFB1间接竞争ELISA方法的建立辣根过氧化物酶标记的二抗（HRP-Ig G）催化底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）显色,溶液由无色变成蓝色,用硫酸终止反应后,通过读取450 nm处吸光度值进行分析,实现AFB1定量检测。所构建的ic-ELISA方法线性方程为:Y=221.722X–50.231,R2=0.993,对AFB1的检测范围是0.29～0.61 ng/m L,最低检测限（LOD）为0.45 ng/m L。在玉米中的加标回收率为100.33%～106.87%,变异系数小于5%,符合美国分析化学家协会（AOAC）的标准。 2.基于CDs的荧光免疫分析法检测AFB1 Cu2+可以猝灭的CDs的荧光,而焦磷酸钠（PPi）可以通过螯合Cu2+来恢复CDs的荧光,当碱性磷酸酶标记Ig G（ALP-Ig G）催化PPi的水解释放Cu2+后,CDs的荧光强度又会降低。通过CDs在460 nm处的荧光强度变化实现AFB1定量检测。所构建的荧光免疫分析法线性方程为Y=5.700 X+60.218,R2=0.992,对AFB1的检测范围为0.0625～4 ng/m L,最低检测限（LOD）为0.034 ng/m L。玉米样品加标回收实验中,回收率为97.91%～103.33%,此外,变异系数均小于10%,这些结果符合美国分析化学家协会（AOAC）的标准。 3.基于DAP和CDs的比率荧光和比色双模式免疫分析法检测AFB1 以2,3-二氨基酚嗪（DAP）和碳点（CDs）为基础,建立了AFB1的双模式免疫检测方法。在HRP-Ig G的催化下,邻苯二胺（OPD）被氧化生成具有黄色和强荧光的DAP,溶液由无色变成黄色。同时,DAP的吸收光谱与CDs的荧光发射光谱重叠,导致CDs的荧光被猝灭。利用DAP和CDs的荧光比值以及DAP的吸光度值变化实现AFB1定量检测。所构建的双模式免疫分析法中荧光法的线性方程为Y=-3.233 X+6.129,R2=0.991,LOD为0.013 ng/m L;比色法线性方程为Y=-0.694 X+1.391,R2=0.991,LOD为0.061 ng/m L。两种模式对AFB1的检测范围均为0.75～1.8 ng/m L;玉米样品加标回收实验中,荧光法的回收率为98.75%～104.25%,比色法的回收率为93.63%～104.63%,此外,变异系数均小于5%,这些结果符合美国分析化学家协会（AOAC）的标准。

摘要译文

关键词：

黄曲霉毒素B1; 碳点; 荧光免疫分析法; 比色免疫分析法

学位年度：

2024

学位类型：

硕士

学科专业：

生物学

导师：

杨华林

中图分类号：

R446.6[免疫学检验]

学科分类号：

083102[医学诊疗技术与器械];100102[医学免疫学];100218[临床检验诊断学]

D O I：

10.26981/d.cnki.gjhsc.2024.000929