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四种柏木属植物内生真菌的分离及生物活性研究认领

作者：

马科贞

学位授予单位：

兰州理工大学

摘要：

本文从柏木属（Cupressus）植物中分离内生真菌,测定其发酵物的抗单胺氧化酶（MAO）、乙酰胆碱酯酶（AChE）和磷酸二酯酶1（PDE1）活性,并对部分内生真菌的化学成分进行了研究。结果如下: 1.内生真菌分离:从四种柏木属植物中一共分离得到51株内生真菌。其中,从干香柏（Cupressus duclouxiana）中分离得到11株,从西藏柏木（Cupressus torulosa）中分离得到13株,从岷江柏木（Cupressus chengiana）中分离得到13株,从柏木（Cupressus funebris）中分离得到14株。 2.活性测定:将分离得到的51株内生真菌分别用PDB培养基和大米固体培养基进行了小批量发酵,通过有机溶剂提取得到153份粗提物样品。对这些样品的抗MAO、AChE、PDE1活性进行测定。结果表明,所有样品对MAO、AChE的抑制活性均较弱。两个样品MJ-j-3-C和BM-j-16-A对PDE1具有较强抑制活性,IC50值分别为46.74±3.16μg/m L和53.96±7.32μg/m L。这两份样品分别来自菌株MJ-j-3的大米培养基发酵粗提物和菌株BM-j-16的PDB培养基发酵粗提物。 3.PDE1活性测定平台的建立:通过筛选最适酶浓度、最适底物浓度、最适pH值、最佳反应温度及反应时长等,基于紫外分光原理利用酶标仪构建了PDE1活性测定平台。最佳反应条件为:PDE1初浓度0.09 UI/m L,底物初浓度6.5 mM,pH 8.9,反应温度45℃,反应时间15 min,L-半胱氨酸(IC50=6.12±0.54μg/m L)为阳性对照。 4.化学成分研究:利用大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、半制备硅胶薄层层析（TLC）等分离手段和NMR波谱鉴定方法,从两种内生真菌中分离并鉴定了20个已知单体化合物:（4R*,5S*）-5-羟基己-4-内酯(（4R*,5S*）-5-Hydroxyhexan-4-olide,1)、（4S,5S）-5-羟基-4-己内酯(（4S,5S）-5-hydroxy-4-hexanolide,2)、脱水甲羟戊内酯（Anhydromevalonolactone,3）、（3R,4R）-3-羟基-3,4-二甲基四氢-2H-吡喃-1-酮(（3R,4R）-3-hydroxy-3,4-dimethyltetrahydro-2H-pyran-1-one,4)、5-羟基-3-羟甲基-2-甲基-7-甲氧基色酮（5-hydroxy-3-hydroxymethyl-2-methyl-7-methoxychromone,5）、Cyclonerodiol（6）、Trichocarotin E（7）、Trichocarane B（8）、Didehydrobisdethio-bis（methylthio）gliotoxin（9）、绿毛菌醇（Viridiol,10）、CAF-603（11）、甘油-1-二十六烷酸酯（2,3-Dihydroxypropyl hexacosanoate,12）、6,9-环氧麦角甾-7,22-二烯-3-醇（6,9-Epoxyergosta-7,22-dien-3-ol,13）、亚油酸甲酯（Methyl linoleate,14）、epi-Guaidiol A（15）、（-）-cadin-4,10（15）-dien-11-oic acid（16）、Trichodermapene C（17）、麦角甾醇（Ergosterol,18）、过氧麦角甾醇（Ergosterol endoperoxide,19）、布雷非德菌素A（Brefeldin A,20）。其中化合物1-19分离自菌株GX-y-3（Trichoderma virens）,化合物20分离自菌株BM-g-3（Fusarium reticulatum）。化合物4作为天然产物首次被分离,化合物1、3、5、14、17、首次从该菌中分离得到,化合物2、9、12、15、16、19首次从该属真菌中分离得到,化合物20首次分离自Fusarium reticulatum。对它们的抗MAO、AChE、PDE1活性进行了测定,以上化合物对MAO、AChE的抑制活性均较弱,化合物10、14对PDE1具有中等的抑制活性,它们的IC50分别为65.93±0.09μg/m L和56.74±1.16μg/m L。 5.菌种鉴定:结合形态学和分子生物学方法,鉴定了部分内生真菌的种属。BM-j-16被鉴定为炭团菌属（Hypoxylon sp.）真菌;GX-y-3被鉴定为绿木霉菌（Trichoderma virens）;BM-g-3被鉴定为网状镰刀菌（Fusarium reticulatum）;MJ-j-3被鉴定为篮状菌属真菌Talaromyces brevis。

摘要译文

关键词：

内生真菌; 次级代谢产物; 生物活性; 磷酸二酯酶1

学位年度：

2023

学位类型：

硕士

学科专业：

药学（专业学位）

导师：

杨中铎

中图分类号：

R284[中药化学]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100804[中药化学]

D O I：

10.27206/d.cnki.ggsgu.2023.002206