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地黄多糖提取纯化、结构表征及生物活性研究认领

被引量： 11

作者：

唐婷

学位授予单位：

贵州师范大学

摘要：

地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)作为传统大宗药材之一,其根部用作传统中药之一。多糖作为地黄中主要的有效成分,因其具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多重生物活性而广受关注。目前,对地黄多糖的研究主要集中在单一提取方法及生物活性方面,对于不同的选择性提取方法的地黄多糖研究未见报道。本论文对地黄多糖提取纯化、结构表征、体外生物活性(抗氧化、降血糖、抗过敏、免疫调节)进行系统的研究。旨在为开发地黄多糖体内生物活性及作用机制提供理论基础,为开发地黄多糖相关的功能性食品提供科学依据。主要内容和结果如下:1.基于不同提取方法地黄多糖的制备及化学成分分析本论文开展了六种选择性提取方法提取地黄多糖:室温冷水浸提法(RGP-1)、沸水浸提法提取室温冷提药渣(RGP-2)、室温50%乙醇超声提法(RGP-3)、室温25%乙醇超声提取50%乙醇超声提取的药渣(RGP-4)、室温超声水提取25%乙醇超声提取的药渣(RGP-5)、80℃热水浸提法(RGP-6)。分离纯化采用三氯乙酸法脱蛋白、醇沉、膜透析、双氧水脱色、醇沉,得到六种不同提取方法的地黄粗多糖。六种不同提取方法的地黄粗多糖得率为RGP-3>RGP-6>RGP-1>RGP-2>RGP-4>RGP-5。通过对地黄多糖组分1-6进行化学成分分析:多糖含量依次为90.19±1.86%、80.22±1.90%、89.33±0.72%、80.97±0.72%、75.43±2.70%、89.89±0.93%;六个地黄多糖组分蛋白质含量均在0.1%内;六个地黄多糖组分中RGP-5糖醛酸含量有最大值14.45±0.45%。2.不同地黄多糖组分的结构分析RGP-1、RGP-3、RGP-6单糖组成为葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸,单糖摩尔比分别为32.56:67.19:0.24、37.74:65.15:0.89、32.71:66.56:0.73;RGP-2、RGP-4单糖组成为葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸、鼠李糖,单糖摩尔比分别为34.39:64.16:11.29:0.314、32.23:63.28:1.08:0.34。RGP-5主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸、鼠李糖组成,其摩尔比为:31.77:58.99:3.96:4.70:0.34。红外光谱和核磁共振光谱表明六种不同选择性提取方法得到的地黄多糖是含有α-型和β-型的糖苷键的吡喃糖;扫描电镜结果表明六个组分地黄多糖为碎片层状结构。热重分析结果表明,不同地黄多糖组分的热重稳定性有差异,其中RGP-3的热稳定性最高。刚果红实验表明地黄多糖无三螺旋结构。3.不同地黄多糖组分的生物活性分析(1)不同地黄多糖组分的抗氧化活性分析。在六种地黄组分中RGP-4和RGP-6为抗氧化活性的优势组分。对于不同的提取方法,羟基自由基结果表明,RGP-6>RGP-1>RGP-5>RGP-4>RGP-2>RGP-3,RGP-6最高清除率为96.76±0.29%;超氧自由基结果分析,超氧自由基活性顺序:RGP-4>RGP-2>RGP-6>RGP-1>RGP-5>RGP-3,RGP-4最高清除率为94.52±0.57%;DPPH自由基结果分析,RGP-5作为活性最高组分其清除率为46.46±0.39%;ABTS自由基结果分析,RGP-4作为活性最高组分其清除率为19.32±0.91%。在六种地黄组分中RGP-4和RGP-6为抗氧化活性的优势组分。地黄多糖对活性氧自由基具有较好的清除作用。(2)不同地黄多糖组分的免疫调节活性分析。研究不同地黄多糖组分对RAW264.7细胞的增殖作用,结果表明RAW264.7细胞增殖的安全浓度范围分别是RGP-1、RGP-3、RGP-5为1-400μg/m L、RGP-2、RGP-4、RGP-6为1-200μg/m L。不同RGP在安全浓度范围内能显著促进RAW264.7吞噬中性红能力和分泌NO能力。其中不同地黄多糖组分间RGP-1的吞噬能力最强,RGP-5通过释放NO量增强免疫能力最好。(3)不同地黄多糖组分的抗过敏活性。研究不同地黄多糖组分抑制透明质酸酶能力,活性大小顺序为RGP-4>RGP-3>RGP-2>RGP-5>RGP-6>RGP-1,RGP-4最高清除率为88.90±0.18%。六个地黄多糖组分对透明质酸酶抑制率均大于70%,地黄多糖具有较好的抗过敏活性。(4)不同地黄多糖组分的降血糖活性。测定α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶两个血糖指标。其中α-淀粉酶抑制率最好为RGP-3最高清除率为30.01±0.88%;α-葡萄糖苷酶抑制率最好为RGP-6最高清除率为16.33±0.24%。地黄多糖的降血糖活性较差。

摘要译文

关键词：

地黄多糖; 提取纯化; 结构表征; 生物活性

学位年度：

2023

学位类型：

硕士

学科专业：

分析化学

导师：

周欣

中图分类号：

R284[中药化学];TQ281[碳水化合物、糖]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100804[中药化学];081702[化学工艺]

D O I：

10.27048/d.cnki.ggzsu.2023.001283