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麦角甾醇类化合物LH-1的分离纯化、结构鉴定和抗肿瘤活性研究认领

作者：

夏童

学位授予单位：

西南医科大学

摘要：

目的:恶性黑素瘤恶性程度高,治疗难度大。因此,临床迫切需要开发新的、有效的治疗恶性黑素瘤的药物。麦角甾醇类化合物因具有独特的生物活性,在癌症治疗中受到广泛关注。本研究分离纯化了一种麦角甾醇类化合物,并对其抗黑素瘤活性及作用机制进行研究。方法:我们从海洋真菌西沙海绵真菌（Pestalotiopsis sp.）的次生代谢产物中提取、分离、纯化和结构鉴定了一种麦角甾醇化合物,命名为LH-1,并进一步研究了其对黑素瘤的抗肿瘤作用。采用MTT法和平板克隆法检测LH-1对肿瘤细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验检测LH-1对肿瘤细胞迁移能力的影响。PI染色、Hoechst 33342染色和Western blot实验研究LH-1对黑素瘤细胞凋亡的影响并探索其作用机制。构建B16-F10细胞诱导的小鼠皮下移植瘤模型验证LH-1在体内抗肿瘤作用,并通过组织病理学方法检测其对正常组织的毒副作用;免疫组化方法探究其抗肿瘤机制。通过RNA-seq筛选了LH-1的抗肿瘤作用靶点,并通过q RT-PCR验证。结果:（1）通过对西沙海绵真菌Pestalotiopsis sp.的次生代谢产物进行提取、分离、纯化以及结构鉴定,获得了麦角甾醇类化合物4,4-dimethyl-5α-ergosta-8,24（28）-dien-3β-ol,并对其命名为LH-1。（2）在体外,LH-1以时间和剂量依赖的方式抑制黑素瘤细胞增殖和迁移。经LH-1处理72 h后,LH-1对黑素瘤细胞A375和B16-F10的IC50分别为13.42μM和16.57μM。（3）PI染色观察到经LH-1处理后,PI阳性细胞数量逐渐增多,Hoechst 33342染色观察到经LH-1处理后凋亡小体和染色质凝集显著增加。Western blot实验结果表明,LH-1作用24 h后促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9的表达水平显著增高,并且抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显降低。结果表明LH-1可能通过线粒体凋亡途径促进肿瘤细胞凋亡。（4）体内实验证实,LH-1可以通过诱导细胞凋亡和减弱细胞增殖能力从而抑制B16-F10小鼠皮下移植瘤的生长,并且对正常组织无明显毒副作用。RNA-seq表明LH-1可能通过上调OBSCN基因表达发挥抗黑素瘤作用。结论:从西沙海绵真菌Pestalotiopsis sp.的次生代谢产物进行提取、分离、纯化以及结构鉴定得到的麦角甾醇类化合物LH-1。体外实验表明LH-1可能通过线粒体凋亡途径促进黑素瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。同时LH-1可以抑制黑素瘤细胞的转移。体内实验表明LH-1可以抑制黑素瘤细胞的增殖、促进黑素瘤细胞的凋亡,并且对正常组织无明显毒副作用。LH-1可能是治疗黑素瘤的潜在药物,本研究可以为海洋微生物次生代谢产物抗黑素瘤研究提供可能的方向。

摘要译文

关键词：

黑素瘤; 麦角甾醇; 抗肿瘤; 线粒体凋亡; OBSCN

学位年度：

2023

学位类型：

硕士

学科专业：

皮肤病与性病学（专业学位）

导师：

熊霞

中图分类号：

R914[药物化学];R739.5[皮肤肿瘤⑨]

学科分类号：

100603[中西医结合药学];100701[药物化学];100705[微生物与生物技术药物学];1002[临床医学]

D O I：

10.27215/d.cnki.glzyu.2023.000293