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不同年生杨黄子实体的化学成分及抗肿瘤活性研究认领

被引量： 1

作者：

和生

学位授予单位：

吉林农业大学

摘要：

杨黄（Phellinus vaninii后文以P.v简写）是一味菌物药,它具有多种药用活性成分,具有药用和经济价值,其学名为瓦尼木层孔菌。本论文首先对杨黄进行了采集鉴定,然后针对不同年生（1年生、2年生、3年生）栽培杨黄子实体的主要活性成分和营养成分及其无机元素进行了测定,同时对不同年生杨黄子实体进行抗肿瘤活性研究,并选用不同年生杨黄子实体不同提取物进行体内抗肿瘤活性及机理研究,最后对其石油醚组分进行化学成分分离与鉴定。通过查阅文献资料对杨黄资源分布、化学成分、药理活性及其针对抗肿瘤机理研究进行了综述。杨黄已经有成熟的人工栽培技术,且栽培面积较大,但对栽培杨黄子实体的化学成分的研究相对较少,依然是不够全面,从现代研究进展来看,杨黄子实体有多糖、黄酮、甾醇等主要化学成分研究相对较多,其他活性成分研究相对较少。杨黄与其他桑黄类真菌均有着相似的抗肿瘤活性,通过文献查找,对杨黄的药理活性研究仅局限于抗肿瘤方面,且对其抗肿瘤机理研究少见。通过外观形态,显微和分子鉴定,对杨黄进行真伪鉴别,从而确保了实验材料的准确性。显微观察杨黄子实体菌丝和孢子结构,与已报道的特征相符。同时,通过杨黄DNA提取、扩增、电泳凝胶成像以及基因测序比对,构建系统发育树,进一步验证了实验材料为菌物药杨黄。不同年生栽培与野生杨黄子实体在化学成分和营养成分上存在一定的差异,通过分析不同年生栽培与野生杨黄的主要成分含量差异,同时用不同年生子实体水提物进行急性毒理实验。结果表明:多糖含量,3年生和朝鲜野生子实体最高（0.83%和0.86%）;黄酮含量,1年生和3年生子实体最高（0.46%和0.49%）;三萜含量,3年生子实体最高（0.67%）;甾醇含量,1年生子实体最高（0.27%）;粗蛋白含量,2年生最高（11.57%）;总必需氨基酸含量,长白山野生子实体最高;无机元素测定中,重金属含量均未超标。急性毒理实验表明,不同年生的杨黄子实体最大给药量（生药量）360g·kg-1时,小鼠饮食、饮水和行为活动均正常,且各脏器均未见异常或病变,对小鼠无明显的急性毒性。不同年生杨黄子实体粉末对H22荷瘤小鼠有抑瘤作用,通过建立小鼠皮下实体瘤模型,按800 mg·kg-1的生药量分别灌胃给予不同生长年限的杨黄子实体细粉,观察小鼠的生长情况、脏器指数及其抑瘤情况,然后剖取肿瘤组织进行苏木精-伊红（H&E）染色病理切片观察,同时眼眶取血,检测血清中相关因子的表达。结果表明:杨黄子实体细粉对肿瘤小鼠有一定的抑制作用,其中3年生杨黄子实体抑瘤效果最为明显（38.12%）,通过对脏器（肺脏、肝脏、肾脏、脾和胸腺）进行脏器指数分析,其中肺脏和肝脏无显著差异（P>0.05）,不同年生杨黄子实体给药组肾脏较模型组显著萎缩（P<0.05）,说明杨黄在起到药效的同时对肾脏的发育有一定的影响,脾脏较阳性组有明显的萎缩（P<0.01）,胸腺较阳性组有明显的增大（P<0.05）,H&E染色观察肿瘤组织细胞,3年生杨黄子实体肿瘤组织细胞出现明显的细胞空隙或空泡现象,细胞排列疏松。血清检测结果与模型组相比,各组中IL-2、IFN-γ、TNF-α和VEGF表达量均显著降低,3年生给药组VEGF显著降低。3年生杨黄子实体抑瘤率最好,因此,使用H22肝癌细胞建立小鼠模型,随机分成模型组,CTX组,低、中、高剂量的杨黄子实体水提物组,乙醇提取物组,石油醚提取物组及粗多糖组,建模2 d后开始给药,抑瘤10 d。计算脾脏、胸腺及肿瘤组织脏器指数和抑瘤率,检测血清中TNF-α、INF-γ、VEGF含量;采用苏木精-伊红（H&E）和免疫组化染色法观察肿瘤组织的病理变化,同时Western blot（WB）检测肿瘤组织中相关蛋白表达水平。结果表明,杨黄子实体各提取物均有抑瘤作用,其中高、中、低组的石油醚提取物抑瘤效果最好,抑瘤率分别为73.21%、69.64%、61.90%,该组血清中的TNF-α、IFN-γ、VEGF的含量均有增加;通过组织切片染色观察,给药组能明显改善肿瘤组织出现的坏死、消融等现象,其中水提物组免疫组化结果出现负调控现象,表现出Bax和Bcl-2蛋白高表达,但其抑瘤效果较差。Western blot检测结果表明,各蛋白呈剂量表达趋势,与模型组相比凋亡基因Caspase-3、Caspase-9和通路基因NF-κb、JAK均表现出高表达,其作用机理可能是通过线粒体途径,药物体内代谢后,引起细胞中的相关凋亡受体（Bax、Bcl-2、TNF等）激活Caspase-3和Caspase-9凋亡蛋白,引起细胞核染色质或DNA凝聚或降解,破坏肿瘤细胞的正常增殖,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤组织的生长。通过气质联用仪（GC-MS）分析杨黄子实体挥发油成分,共分离出41个峰,通过CAS检索,检测出烃类化合物10个,酯类化合物7个,醇酚类化合物18个,醛酮类3个;分析杨黄石油醚提取物,共出现9个共有峰,CAS号查询分析,烯烃类化合物1个,脂肪酸类化合物2个,甾醇类化合物4个,酮类化合物1个。同时通过系统分离石油醚提取物共获得5个单体化合物。

摘要译文

关键词：

杨黄子实体; 活性成分; 营养成分; H22荷瘤小鼠; 抗肿瘤; 化学成分

学位年度：

2021

学位类型：

硕士

学科专业：

中药学

导师：

包海鹰

中图分类号：

R284.1[化学分析与鉴定];R285[中药药理学]

学科分类号：

100803[中药鉴定学];100804[中药化学];100805[中药分析学];100505[临床中药学];100801[中药资源学];100806[中药药理学];100808[临床中药学]

D O I：

10.27163/d.cnki.gjlnu.2021.000144