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基于LC-MS技术对林下山参鉴别及生长年限判定的研究认领

被引量： 2

作者：

张艳欣

学位授予单位：

上海中医药大学

摘要：

目的:林下山参为我国传统名贵药材,近年来随着其在食品、医疗领域的广泛应用,其质量愈加成为人们关注的焦点。由于林下山参资源稀缺,价格昂贵且市场需求大,假冒林下山参及掺伪现象不断增多,制定林下山参科学准确的质控方法,完善林下山参质量标准,显得尤为重要。林下山参作为多年生草本植物,采收年限对其质量有重要影响,对生长年限的正确判断与质量控制息息相关。本课题对辽宁省桓仁地区林下山参展开研究,通过建立林下山参HPLC指纹图谱结合多成分含量测定方法,利用LC-MS技术解析林下山参化学物质成分,基于代谢组学技术深度研究林下山参代谢物组分,结合多元统计方法对结果进行分析,对林下山参质量评价、生长年限研究以及林下山参与园参的鉴别具有一定意义。方法:（1）对林下山参的提取方法进行单因素考察,完成林下山参供试品制备方法初步确定,再通过均匀设计优化确定最优提取条件。通过HPLC-PDA对样品进行色谱条件考察,建立林下山参HPLC指纹图谱结合多成分含量测定方法。（2）采用HPLC-PAD对林下山参指纹图谱进行分析,运用国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》（2012版）软件进行分析,生成10、15年和20年林下山参指纹图谱共有模式。利用UPLC-Q-TOF/MS对指纹图谱共有峰进行鉴定;利用SIMCA-P软件以峰面积为变量进行聚类分析、正交偏最小二乘法分析。（3）基于UPLC-Q-TOF/MS的植物代谢组学技术分析林下山参与园参,对30批林下山参与10批园参差异性代谢物进行研究。结果:（1）确定了林下山参最佳提取工艺:提取方法为超声提取后,旋转蒸发至干后复溶;提取溶剂为70%甲醇;提取时间为100 min;提取温度为50°C。建立了林下山参指纹图谱结合多成分含量测定方法:色谱柱采用Waters CORTECS C18（150 mm×4.6 mm,2.7μm）,检测波长203 nm,柱温30°C,进样量5μL,流速1.0 m L/min,流动相以0.1%甲酸-乙腈为A相,0.1%甲酸-水溶液为B相进行梯度洗脱。测定了人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc和Rd的含量。（2）生成林下山参指纹图谱共有模式,以人参皂苷Re为参照峰,标定33个共有峰,并利用UPLC-MS技术对16个色谱峰进行了解析。以指纹图谱共有峰面积为依据建立的OPLS-DA判别模型可区分林下山参与园参、不同参龄（10年、15年和20年）林下山参。（3）基于UPLC-Q-TOF/MS的植物代谢组学技术分析林下山参与园参,利用PCA、PLS-DA、OPLS-DA等分析方法鉴定林下山参生长年限范围、鉴别林下山参与园参,并对影响分组贡献率较大的差异代谢物在不同样本的丰度进行分析。结论:本课题首次建立辽宁桓仁产区林下山参的指纹图谱结合多成分含量测定方法,从整体对林下山参质量进行评价。利用指纹图谱结合数理统计方法,建立OPLS-DA判别模型,可用于区分林下山参和园参、不同生长年限的林下山参。基于UPLC-Q-TOF/MS的植物代谢组学从代谢物层面技术区分林下山参和园参及不同参龄林下山参。本实验建立的检测方法合理、稳定、可靠且重现性好,可用于不同参龄林下山参质量评价分析、生长年限相关研究及林下山参与园参的鉴别研究。

摘要译文

关键词：

林下山参; 指纹图谱; LC-Q-Tof-MS; OPLS-DA

学位年度：

2019

学位类型：

硕士

学科专业：

中药学（专业学位）

导师：

高崎

中图分类号：

R282.5[药材鉴定]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100803[中药鉴定学];100805[中药分析学]

D O I：

10.27320/d.cnki.gszyu.2019.000697