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人体唾液中同时检测3种糖化中间体新方法的研究及应用认领

作者：

王婧

学位授予单位：

延边大学

摘要：

糖尿病是一种由胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍导致的以高血糖为特征的代谢性疾病。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官,尤其对眼和肾的损害较大,导致其功能障碍并衰竭。糖化终产物中间体乙二醛（Glyoxal,GO）、甲基乙二醛（Methylglyoxal,MGO）和3-脱氧葡萄糖苷（3-Deoxyglucosone,3-DG）的含量与糖尿病及其并发症密切相关。迄今为止,因糖化中间体GO,MGO和3-DG稳定性较差,在已报道的分析方法中,柱前衍生化法是目前在不同样品中量化糖化中间体的最有效的方法。因衍生化后不仅可以增加糖化中间体的稳定性,而且可以提高疏水性,可在廉价的反相色谱柱中提高保留时间和灵敏度。另外、人体唾液作为不同于血液、尿液的非侵袭性生物样品,具有采集方便、感染性低、前处理简便、易于大众接受等特点。鉴于此,我们开发了一种基于柱前衍生化同时检测人体唾液中3种糖化中间体的UHPLC-MS/MS新方法并应用于健康人及糖尿病患者的唾液中。以4,5-Dimethyl-1,2-phenylenediamine（DMPD）作为衍生化试剂,以2,3戊二酮（PTD）为内标,DMPD与GO,MGO和3-DG在60℃下反应2 h。以BEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7μm）为色谱柱,流动相A为0.1%甲酸水溶液,B为0.1%甲酸乙腈溶液,在梯度为B%=10-65%（0-6 min）下对3种糖化中间体标准品进行了分析,并应用于健康人和糖尿病患者唾液中糖化中间体含量的比较。结果表明,在6 min内3种糖化中间体衍生化产物达到良好的分离。在0.1-62.5 pmol范围内线性关系良好（R2>0.9992）;检测限LOD（S/N=3）为0.80-2.67 fmol,定量限LOQ（S/N=10）为2.0-16.67 fmol;日内、日间精密度为4.28-11.32%;健康人唾液中的添加回收率为90.00-108.85%。在健康人及糖尿病患者唾液中均检测到GO,MGO和3-DG 3种糖化中间体,糖尿病患者组唾液中GO,MGO和3-DG含量均高于健康志愿者,且具有显著性差异（p<0.01）。本研究建立了一种基于DMPD柱前衍生化同时检测人唾液中3种糖化中间体的UHPLC-MS/MS新方法。本方法具有灵敏度高、分析时间短、准确度高等特点,为非侵袭性人体唾液中糖化中间体及羰基代谢物的检测及糖尿病预警筛查提供了一种新的分析策略。

摘要译文

关键词：

糖化中间体; 唾液; DMPD; 柱前衍生化; LC-MS/MS

学位年度：

2021

学位类型：

硕士

学科专业：

药物分析

导师：

闵俊哲

中图分类号：

R446.1[生物化学检验、临床检验];R587.1[糖尿病⑨]

学科分类号：

080404[生物医学仪器及技术];083102[医学诊疗技术与器械];100218[临床检验诊断学];100201[内科学]

D O I：

10.27439/d.cnki.gybdu.2021.000792