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生慧颗粒的制备工艺与益智延寿药效物质基础研究认领

被引量： 7

作者：

周天姣

学位授予单位：

湖北中医药大学

摘要：

第一部分生慧颗粒制备工艺研究目的:目前我国人口老龄化形势日益严峻,作为常见的老年病,阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)的发病率呈现上升趋势,由于其难治性和发病机制不确定性,必将长期成为医学研究的热点。生慧汤载于清代名医陈士铎的《辩证录?健忘门》,全方由熟地黄、石菖蒲、山茱萸、远志、柏子仁(去油)、酸枣仁、茯神、人参、白芥子九味中药组成,具有益气养血,交通心肾的功效,临床上常用于治疗老年性痴呆。我校老年医学研究所多年的临床实践证明,生慧汤具有良好的改善学习记忆能力和防治失眠的功效。原方为汤剂,未建立起一套控制质量的规范,且具服用量大、不易携带等缺点,因此本研究团队运用传统工艺及现代分析技术将其开发为医院制剂,以期克服汤剂所存在的不足之处。生慧汤水提物收膏率较高,故选择将其制成颗粒剂,生产过程简单、易于贮藏运输、患者服用的顺应性高、作用迅速,利于医院药剂室使用,能较好满足其临床运用的目的。方法:生慧颗粒制备工艺研究包括提取工艺、纯化工艺、浓缩干燥工艺、成型工艺的研究。采用正交试验法,以莫诺苷和马钱苷的总含量及干膏得率为评价指标优选水提工艺,并进行验证试验。为减少日服剂量,同时考虑到实际生产中经济便捷的要求,选择静置纯化,在室温与冷藏两种情况下,分析静置时间对评价指标的影响,并对浓缩干燥工艺进行考察。在成型工艺中,以吸湿率、成型性、流动性为评价指标,优选辅料种类、辅料用量与制粒条件。按照最佳制备工艺制备生慧颗粒,根据2015版《中国药典》四部制剂通则0104对生慧颗粒进行相应的检查。优选出的最佳制备工艺参数为:全方药材浸泡1小时,补足药材吸水量,加至10倍量的水,提取2次,每次1.5小时;提取液在室温下(25℃)静置12小时,吸取上清液,浓缩至相对密度为1.07-1.08(60℃)的清膏,加入0.5-1倍左右干膏量的糊精,混匀,置60℃减压干燥箱中干燥,研磨至粉,喷洒80%乙醇过1号筛制软材,置60℃干燥,用1号筛与5号筛整粒,制备的颗粒均符合2015版《中国药典》四部制剂通则0104的各项检查。结果:结论:本试验优选的制备工艺切实可行,验证三批小试结果均符合规定,小试工艺条件经中试进一步调整后,可过渡到产业化生产。第二部分基于系统生物学的生慧颗粒益智药效物质与机理研究目的:本部分基于网络药理学与秀丽隐杆线虫试验,对生慧颗粒防治AD的药效物质基础、作用机制进行了初步研究,以期为生慧颗粒的临床应用提供科学依据以及为中药复方防治AD开拓新思路。方法:1.生慧颗粒防治AD的网络药理学研究:首先通过TCMSP等中药数据库对方中9味中药的化学成分进行系统的整理分析,随后运用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS色谱技术进行定性分析,以现有的对照品结合色谱图、质谱离子片段的保留时间和相关文献筛选出与AD靶点密切相关的活性成分;由薄层色谱(TLC)-生物自显影技术快速检测生慧颗粒中抗氧化活性成分;通过计算AD与非AD患者基因表达差异探索生慧颗粒成分作用的核心靶点,由KEGG与GO富集分析寻找生慧颗粒防治AD的多种潜在作用机制。2.生慧颗粒的药理学研究:选择秀丽隐杆线虫作为试验模式生物,通过百草枯氧化胁迫试验筛选生慧颗粒具有抗氧化活性的最佳药物浓度;通过寿命试验考察生慧颗粒抗衰老、延寿药理作用;通过趋化以及短期联想学习记忆试验,以期证实生慧颗粒的提高学习记忆能力、改善健忘的功效;运用UHPLC-QQQ-MS色谱技术检测秀丽隐杆线虫给药后神经递质的含量变化,以期阐释生慧颗粒具有增强学习记忆能力作用机制。结果:1.利用网络药理学分析得到93种化学成分,结合UHPLC-LTQ-Orbitrap色谱技术,筛选出其中5种与AD靶点密切相关的共同活性化合物,即芦丁、芥子酸、金丝桃苷、槲皮苷、山萘酚;由TLC-生物自显影试验证实生慧颗粒中这五种成分具有抗氧化活性,同时一些具有较强抗氧化作用的未知成分尚需要通过富集、结构鉴定加以确认;由Drug Bank分析,一共得到202个靶点,其中169个靶点与AD相关,19个靶点与AD直接作用,联合蛋白互作网络(PPI)结果发现,ADRA1B、ADRA1A、ADRA1D、ADRB2、F2、GABRA2、GABRA1、CHRM2、CHRM1、CHRM3这10个靶点主要与神经元-突触有关;由生物过程和信号通路富集分析得到生慧颗粒防治AD可能与调节肾上腺素能受体、神经元-突触通路、胆碱能通路有关。2.百草枯氧化胁迫试验优选的最佳药物浓度为40 mg/ml。以最佳浓度开展的寿命试验结果表明,生慧颗粒与化合物芥子酸均能显著延长野生型秀丽隐杆线虫的生存时间;短期联想学习记忆试验结果表明,生慧颗粒组比空白组的联想记忆能力更强,至遗忘的时间点更远;UHPLC-QQQ-MS色谱技术检测神经递质试验结果表明,与空白组相比给药组的肾上腺素(Epi)、谷氨酸(Glu)水平显著降低,多巴胺(DA)、γ-氨基丁酸(GABA)水平显著升高。结论:1.芦丁、芥子酸、金丝桃苷、槲皮苷、山萘酚为生慧颗粒中与AD靶点密切相关的主要活性成分,其良好的抗氧化活性可能是生慧颗粒防治AD的主要药效物质基础。2.生慧颗粒可能通过调节肾上腺素能受体等生物过程,影响核心靶蛋白的表达,作用于神经元-突触通路、胆碱能通路发挥药效。3.生慧颗粒对秀丽隐杆线虫具有抗氧化应激、延寿、增强联想记忆能力的药理活性。4.生慧颗粒可以调节秀丽隐杆线虫的DA、Glu、GABA和Epi等神经递质水平,这可能是使其学习记忆能力提高的因素之一。

摘要译文

关键词：

生慧颗粒; 制备工艺; 水提工艺; 成型工艺; 网络药理学; 秀丽隐杆线虫; 阿尔茨海默症; 生慧汤

学位年度：

2021

学位类型：

硕士

学科专业：

中药学

导师：

昝俊峰

中图分类号：

R283.6[剂型]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100807[中药药剂学]

D O I：

10.27134/d.cnki.ghbzc.2021.000115