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玉米赤霉烯酮可视化检测方法研究认领

被引量： 1

作者：

韦丽婷

学位授予单位：

江南大学

摘要：

玉米赤霉烯酮是由镰刀菌产生的一种非甾体雌激素样作用的真菌毒素,主要污染谷类食品和饲料,具有很强的生殖毒性、神经毒性和致癌性,对人类和动物产生巨大的危害。目前用于检测玉米赤霉烯酮的方法虽然能够完成对食品中玉米赤霉烯酮的检测,但是检测操作比较繁琐,需要用到比较昂贵的仪器和专业操作,不适用于进行大批量样品快速检测。可视化检测方法操作简单,检测时间短,而且可用肉眼判断实验结果,能够满足对玉米赤霉烯酮高灵敏度、高特异性和快速的检测要求。本论文的主要研究工作如下:1.建立了一种基于竞争性酶联适配体的玉米赤霉烯酮可视化检测方法:将生物素标记的玉米赤霉烯酮适配体通过生物素-亲和素连接固定在酶标板上,互补链与辣根过氧化物酶（HRP）连接形成互补链-HRP信号探针,信号探针和靶标竞争与适配体结合,加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）显色液和硫酸终止液观察颜色变化;在最佳实验条件下,溶液在450 nm处的吸光度值与玉米赤霉烯酮浓度在1 ng/mL10000 ng/mL范围内呈良好的线性关系（R2=0.9913）,检测限为0.7 ng/mL。实际样品加标回收实验结果与酶联免疫吸附法（ELISA）相比无明显差异,证明本实验方法可用于实际样品的检测。2.建立了一种基于适配体功能化纳米金的玉米赤霉烯酮可视化检测方法:分别将巯基化玉米赤霉烯酮适配体和互补链连接到纳米金表面形成捕获探针和信号探针,当待测物中存在玉米赤霉烯酮时,玉米赤霉烯酮和互补链竞争与适配体结合,在高盐浓度下,纳米金发生聚集,颜色由红色变为紫色;当待测物中不存在玉米赤霉烯酮时,适配体与互补链杂交使纳米金颗粒之间形成稳定的网络结构,在高盐浓度下纳米金不发生聚集,颜色仍为红色。在最佳实验条件下,玉米赤霉烯酮浓度与A650/A525比值呈良好的线性关系,线性范围为0.1 ng/m L1000 ng/mL（R2=0.9952）,检测限为0.1 ng/mL。实际样品加标回收实验结果与ELISA方法相比无明显差异,证明本实验方法可用于实际样品的检测。3.建立了一种基于Au-MoS2模拟酶信号放大的玉米赤霉烯酮可视化检测方法:将生物素化的玉米赤霉烯酮适配体通过生物素-亲和素连接固定在酶标板上,玉米赤霉烯酮适配体的互补链与Au-MoS2模拟酶连接形成信号探针,Au-MoS2模拟酶具有信号放大的作用,互补链-Au-MoS2信号探针和靶标竞争与适配体结合,加入TMB显色液和硫酸终止液即可显色。在最佳实验条件下,溶液在450 nm处的吸光度值与玉米赤霉烯酮浓度呈良好的线性关系,线性范围为0.1 ng/mL10000 ng/mL（R2=0.9953）,检测限为0.05 ng/m L。实际样品加标回收实验结果与ELISA方法相比无明显差异,证明本实验方法可用于实际样品的检测。

摘要译文

关键词：

适配体; 玉米赤霉烯酮; 模拟酶; 可视化检测

学位年度：

2018

学位类型：

硕士

学科专业：

营养与食品卫生学

导师：

王周平

中图分类号：

TS210.7[产品标准与检验];R155.5[食物卫生与检验]

学科分类号：

0822[轻工技术与工程];083203[粮食油脂及植物蛋白工程];083206[食品安全];100225[预防医学];100403[营养与食品卫生学]