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玉米源肽对肝细胞酒精性损伤的保护作用认领

被引量： 22

作者：

宋雪梅

学位授予单位：

吉林大学

摘要：

人类的饮酒历史源远流长,自古以来,酒作为一种特殊食品,在日常生活和社会交往等方面发挥着重要的作用。但过量饮酒不仅能够导致酒依赖,还会增加人们患病的危险。如酒精性脂肪肝、肝硬化、酒精性肝炎、消化系统疾病等;世界卫生组织（WHO）在1979年就提出:过量饮酒已构成对人类健康和生命健康最严重的威胁,不当使用酒精已成为全球过早死亡和致残的第五大主要危险因素。酒精性肝病（alcoholic liver disease,ALD）又称酒精性肝损伤,是由于长期或过量摄入酒精导致的肝脏疾病。这种疾病的发病过程伴随氧化应激、脂肪积累、炎症反应、细胞凋亡等病理生理反应,并且由于ALD与遗传因素和外界环境因素有关,导致酒精性肝损伤的发病机制非常复杂,至今没有特异性且效果显著的治疗方法。本文以玉米源肽为实验原料,从氧化应激和脂质代谢两个角度出发,研究玉米源肽对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用及其机制,为玉米肽在酒精性肝病的预防和治疗提供理论基础。本文以八条已知序列的玉米源肽通过固相合成做为实验原料（YFCLT、GHKPS、QLLPF、KLNPA、QFLP、AYLQ、FLPF、LLPF）,首先通过体外化学评价方法,以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、羟基自由基清除率、Fe2+螯合能力、氧自由基吸收能力五个指标,综合评价八条玉米源肽的体外抗氧化活性。结果表明,八条玉米源肽都有一定的抗氧化活性,综合评价玉米源五肽抗氧化活性依次为:YFCLT>GHKPS>KLNPA>QLLPF;四肽抗氧化活性依次为:QFLP>FLPF>LLPF>AYLQ。五肽YFCLT在浓度为1000μM时,其DPPH自由基清除率为（65.09±0.15）%,其ABTS+·自由基清除率为（87.46±0.10）%,对应的TEAC值为（89.20±0.86）μM TE/1000μM,清除羟基自由基能力为（86.75±0.88）%,螯合Fe2+能力为（61.41±1.93）%,EDTA抗氧化当量值为（25.55±0.76）μM EE/1000μM;氧自由基吸收能力最强,直至160min后,相对荧光强度才接近0,也强于1μM Trolox。其次,为了进一步研究玉米源肽的体外细胞抗氧化活性,通过MTS法测定细胞增殖能力,采用酒精为诱导剂诱导建立人肝癌细胞（HepG2）酒精性损伤模型,使细胞存活率在50%左右,确定酒精最佳作用浓度为500mM时诱导孵育HepG2细胞24h,此时细胞存活率为（59.61±6.07）%。利用HepG2细胞模型评价了八条玉米源肽的抗氧化活性,其中五肽YFCLT（Tyr-Phe-Cys-Leu-Thr）的抗氧化应激作用最强。同时,细胞毒性实验表明,八条玉米肽对细胞都无毒性作用。再次,综合体外化学和细胞实验结果筛选出玉米源五肽YFCLT进行抗氧化应激机制研究。研究结果表明,玉米源五肽YFCLT可降低肝细胞损伤指标（AST、ALT）,并有效提高抗氧化酶系（SOD、CAT、GSH-Px）活力、降低活性氧自由基ROS水平以及炎症因子TNF-α的含量。综合表明玉米源五肽YFCLT对酒精性肝细胞具有抑制氧化应激作用。最后,本文测定了玉米源肽对酒精性肝细胞模型的调节肝细胞脂质代谢作用,在甘油三酯含量,脂肪累积以及AMPK信号通路方面的影响。结果表明玉米源五肽YFCLT能够有效降低由于酒精增加的甘油三酯和脂肪液滴的累积,并可以对AMPK信号通路进行调节,促进AMPK磷酸化,改善脂质代谢的作用。以上实验结果可以表明,玉米源五肽YFCLT具有一定的抗氧化活性,并且能从抗氧化应激与调节脂质代谢两方面对酒精性肝细胞损伤起到保护作用。

摘要译文

关键词：

玉米肽,HepG2细胞,抗氧化应激,脂质代谢; 酒精性肝损伤

学位年度：

2018

学位类型：

硕士

学科专业：

食品科学与工程

导师：

于亚莉

中图分类号：

TS201.4[食品营养学]

学科分类号：

0822[轻工技术与工程];083201[食品科学];083205[食品营养]