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烟草烟雾暴露对人中性粒细胞诱捕网形成的影响及红霉素干预作用的体外研究认领

被引量： 1

作者：

唐启亚

学位授予单位：

广西医科大学

摘要：

目的:探讨不同浓度香烟烟雾提取物浓度在体外对外周血中性粒细胞生成中性粒细胞外诱捕网(NETs)的影响,吸烟相关慢性阻塞性肺疾病患者较正常人对烟草烟雾刺激外周血中性粒细胞产生NETs敏感性的异同及红霉素的干预作用。方法:招募平均年龄在64岁的稳定期COPD患者及健康自愿者各10名,分离纯化其外周血中性粒细胞后进行刺激分组:(1)分别使用0.1%、0.3%、0.5%、1%及2%浓度的香烟烟雾提取物(CSE)对正常人中性粒细胞进行刺激,利用荧光DNA定量法观察各浓度CSE刺激下中性粒细胞发生NETosis的情况;(2)使用PMA、CSE分别对COPD组及正常人组其进行刺激,应用免疫荧光染色法观察各组NETs的生成情况及CSE诱导生成NETs的形态特征及组成结构;应用荧光DNA定量法对各组中性粒细胞的NETs生成情况进行定量;(3)对正常人外周血中性粒细胞在固定使用0.1%CSE进行刺激的前提下,分别用浓度为1μg/mL、5μg/mL及10μg/mL的红霉素对其进行干预,利用荧光DNA定量法定量各浓度红霉素干预下对烟草烟雾诱导中性粒细胞发生NETosis化的抑制情况;(4)在固定使用0.1%CSE对COPD组病人外周血中性粒细胞进行刺激的前提下同时应用10μg/mL的红霉素进行干预,用荧光DNA定量法定量各组经红霉素干预后NETs的生成情况。结果:(1)0.1%-0.5%CSE组刺激人中性粒细胞产生NETs浓度(526.1±182.7ng/ml、424.8±103.1ng/ml、381.2±82.2ng/ml)较正常对照组(299.8±72.0ng/ml)增高,P<0.05;1%CSE及2%CSE刺激组NETs形成浓度(362.1±117.5ng/ml、351.8±117.6ng/ml)较正常组(299.8±72.0ng/ml)而言差异不明显,P>0.05;(2)荧光DNA染色示经香烟烟雾刺激诱导中性粒细胞所产生的NETs较正常对照组增多,共染提示NETs上含有NE、CITH3,它们随DNA网状结构一同释放出胞外;在无任何刺激的情况下,正常人生成NETs的浓度(265.7±74.1ng/ml)与COPD组(323.8±79.7ng/ml)相比并无明显差异,P>0.05;在PMA刺激下,COPD(433.5±98ng/ml)与正常组(314.5±74.1ng/ml)生成的NETs量相较下明显增高,差异具有统计学意义,P<0.05;在CSE的刺激下,COPD组(439.7±121.8ng/ml)对比正常组(333.3±84.2ng/ml)NETs生成的量具有统计学差异,P<0.05;(3)在1μg/ml红霉素干预下生成的NETs-DNA含量(282.2±117.8ng/ml)较正常组(364.8±145ng/ml)比较并无明显差异,P>0.05;5μg/ml红霉素组(248.9±86ng/ml)及10μg/ml红霉素组(257.4±90.3ng/ml)相较正常组(364.8±145ng/ml)比,NETs的释放量明显减少,差异具有统计学意义,P<0.05;(4)在正常人组中加入10μg/ml红霉素(249.2±82.5ng/ml)及DPI干预(251.5±67.7ng/ml)的CSE刺激组相较刺激对照组(333.3±84.2ng/ml)而言,NETs的释放量都有所减少,差异具有统计学意义,P<0.05;同样的,COPD组中红霉素干预组(337.9±75.4ng/ml)及DPI干预组(303.4±44.6ng/ml)的NETs-DNA浓度也比单纯刺激组(439.7±121.8ng/ml)低,差异具有统计学意义,P<0.05。结论:(1)CSE能够刺激诱导人中性粒细胞产生NETs,不同浓度CSE刺激所产生的NETs量呈先增高后降低趋势;(2)CSE诱导的人外周血中性粒细胞产生的NETs与既往认知的NETs一样,同样存在NE、CITH3组分;COPD患者中性粒细胞经CSE刺激后较正常人更容易NETosis化;(3)红霉素与烟草烟雾诱导的网状网存在剂量-效应关系。(4)红霉素治疗CSE刺激诱导COPD中性粒细胞所产生的NETosis进程有抑制作用。

摘要译文

关键词：

慢性阻塞性肺疾病; 中性粒细胞外诱捕网; 香烟烟雾; 红霉素

学位年度：

2018

学位类型：

硕士

学科专业：

呼吸内科

导师：

钟小宁

中图分类号：

R563.9[其他⑨]

学科分类号：

100201[内科学]