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抗登革病毒药物体外筛选模型的建立及FNC抗登革病毒的活性研究认领

被引量： 4

作者：

张春涛

学位授予单位：

大理大学

摘要：

登革病毒（Dengue virus,DENV）引起的登革热是一种急性传染病。近年来,由于流动人口的增加以及全球变暖,登革热的流行趋势日益严重。登革热被世界卫生组织列入被忽视的热带病之一,至今无特异性抗登革病毒药物上市。本研究首先选用利巴韦林作为阳性药物,通过DENV-Ⅱluc+病毒复制子检测荧光素酶活性进行化合物初步筛选,筛选到的有效化合物通过噬斑实验进行复筛;再通过蛋白印迹实验验证化合物的有效性,最后采用MTT法检测该化合物的细胞毒性,从而建立抗登革病毒体外药物筛选模型。研究结果显示利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC50为40.78±1.02μM,结果与其他报道接近,成功建立稳定可靠的抗登革病毒体外药物筛选模型。利用该模型筛选了807个化合物,发现阿兹夫定（Azvudine,FNC）具有良好的抗DENV-Ⅱ活性。其次对FNC、盐酸阿兹夫定（Hydrochloride salt of azvudine,FNC-HCL）和三磷酸酯阿兹夫定（Triphosphate azvudine,FNC-TP）作用于DENV的体外抑制活性进行研究。结果发现FNC、FNC-HCL和FNC-TP抑制DENV复制的EC50在25.42±6.70-0.54±0.29μM之间,同时测得阳性药物利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC50为40.78±1.02μM。蛋白印迹实验及定量结果显示FNC、FNC-HCL和FNC-TP均能抑制DENV E蛋白的表达,并且显著地抑制DENV病毒RNA的复制。说明F NC、FNC-HCL和FNC-TP在细胞水平和蛋白水平均能抑制DENV的复制,且抑制作用优于利巴韦林,通过对FNC进行分时给药及分时撤药实验,发现其作用于登革病毒RNA的合成阶段。FNC有望成为抗登革病毒的候选药物。最后对FNC的体内抗登革病毒活性进行研究。首先选用4-6周龄的BaBb/c小鼠脑内注射接种DENV-ⅡD1090病毒株,小鼠出现体重减轻、弓背、后肢瘫痪等症状,成功建立小鼠感染模型。BaBb/c小鼠感染DENV后,以每天2mg/kg的剂量灌胃给药,发现FNC在感染DENV后的BaBb/c小鼠体内治疗效果欠佳。

摘要译文

关键词：

登革病毒; 抗病毒活性; 阿兹夫定; 体内; 体外

学位年度：

2018

学位类型：

硕士

学科专业：

药学

导师：

郑永唐

中图分类号：

R965[实验药理学]

学科分类号：

100109[医学药理学];100603[中西医结合药学];100706[药理学]