植物内生真菌具有复杂独特的代谢途径,可以产生结构新颖、活性良好和种类繁多的次级代谢产物,为新药的开发提供了丰富的药物先导化合物。本文对兰花蕉(Orchidantha N.Chinensis T.L.Wu)和藏红花(Saffron,Crocus Sativus L.)的内生真菌次级代谢产物进行了系统的研究。研究内容包括以下几个部分:1)兰花蕉内生真菌的分离;2)兰花蕉内生真菌的化学筛选和活性筛选;3)兰花蕉和藏红花内生真菌次级代谢产物的分离纯化;4)确定两种植物内生真菌单体化合物的结构;5)部分单体化合物的活性测定。论文的第一章首先介绍了植物内生真菌的定义及多样性,然后综述了近几年来文献报道的从植物内生真菌分离得到的新化合物结构以及相关的生物活性研究情况,最后总结了濒危植物兰花蕉和珍贵药材藏红花的研究进展。兰花蕉民间用作清热解毒药,具有润肺止咳的功效,然而由于环境破坏及自身繁殖能力下降,已被列为濒危植物的行列。藏红花具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神的功效,由于柱头入药,产量极低,被誉为“植物黄金”。论文的第二章采用组织块法,从兰花蕉的根、根状茎、叶和叶柄中分离得到42株内生真菌。采用化学筛选与生物活性筛选相结合的筛选模式对42株植物内生真菌的微量粗提物进行筛选。化学筛选,利用TLC显色方法,根据菌株代谢物多样性进行筛选;生物活性筛选,以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌等7种病原菌为致病菌模型进行生物活性筛选。综合化学与生物活性筛选得到两株目标菌株OC42和OC4,对其次级代谢产物进行研究。论文的第三章对菌株OC42采用摇床培养的方式培养100 L,发酵液用乙酸乙酯萃取,浓缩后得浸膏;菌丝体用甲醇浸泡,乙酸乙酯萃取浓缩得浸膏。合并发酵液浸膏和菌丝体浸膏得粗提物。利用硅胶、凝胶柱色谱和重结晶等分离技术从粗提物中分离到11个化合物,运用核磁共振、质谱和红外等波谱技术确定了10个化合物的结构,分别是Pinellic acid,对羟基苯甲酸(OC42-2),N-(2-氨基-2-乙氧基)-苯甲酰胺(OC42-3),胸腺嘧啶(OC42-4),(9S,10R)-9,10-二羟基十八烷酸(OC42-5),(22E,24S)-6,9,(11),22-三烯-过氧化麦角固醇(OC42-6),(22E,24S)-6,22-二烯-3β,5α,8β-过氧化麦角固醇(OC42-7),麦角甾醇(OC42-8),(22E,24R)-啤酒甾醇(OC42-9)和2,3二羟基十六酸丙酯(OC42-10)。化合物OC42-3为新的天然产物。论文的第四章对菌株OC4进行固体发酵,发酵产物用甲醇浸泡,浓缩,乙酸乙酯提取得粗提物。利用硅胶柱层析等化学分离技术从粗提物中分离到3个化合物,运用核磁共振等现代波谱技术鉴定化合物的结构分别为(2S,5R)-2-甲基-5-乙基己二酸(OC4-1),(22E,24R)-啤酒甾醇(OC4-2)和(22E,24S)-6,22-二烯-3β,5α,8β-过氧化麦角固醇(OC4-3),其中(2S,5R)-2-甲基-5-乙基己二酸为新化合物。采用滤纸片法对OC4-1进行抑菌活性检测,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌为指示菌,结果表明对三种病原菌几乎没有抑制活性。利用DPPH自由基清除试验和超氧阴离子自由基清除试验对化合物OC4-1进行抗氧化活性评价,发现对超氧阴离子自由基有较强的抑制活性,IC50值为1.08 mg/mL。论文的第五章对藏红花内生真菌CSL-13的次级代谢产物进行研究。前期工作中发现藏红花内生真菌CSL-13具有良好的抑菌活性,因而对藏红花内生真菌CSL-13进行固体发酵,发酵产物用甲醇浸泡,浓缩,乙酸乙酯萃取得粗提物。利用硅胶柱层析等化学分离技术从粗提物中分离到3个化合物,运用核磁共振等现代波谱技术鉴定化合物的结构分别为白僵菌素(CSL13-1),(22E,24S)-6,22-二烯-3β,5α,8β-过氧化麦角固醇(CSL13-2)和Prolipyrone C(CSL13-3)。本章对CSL13-1的生源合成进行了初步探讨。 摘要译文