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杀松材线虫海洋放线菌HT-8的分离鉴定、培养条件及其活性物质分析认领

被引量： 4

作者：

陈聪聪

学位授予单位：

青岛大学

摘要：

松树萎蔫病是松属植物的一种毁灭性疾病,松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是松树萎蔫病的重要病原物,该疾病在全球范围内造成了巨大的经济损失和环境破坏。从自然界中寻找对松材线虫具有高致死性的微生物及其代谢产物已成为研发新型杀线虫剂的一个研究热点。本文对从青岛麦岛近海海域采集的样品采用稀释涂布平板法分离共得到21株海洋放线菌,使用浸渍法对放线菌培养滤液进行杀松材线虫活性测定,从中筛选出了1株具有较高杀线活性的放线菌HT-8。该菌株分离自海泥,其培养滤液处理松材线虫72 h,松材线虫的校正死亡率高达88.30%。通过形态学观察,生理生化特性和16S rDNA序列测定及其系统发育分析,将菌株HT-8鉴定为白蚁链霉菌(Streptomyces termitum)。采用单因素法分析菌株HT-8的最佳培养条件,结果表明,产杀线活性物质的最适培养基海水浓度、起始pH、培养温度、培养时间分别为1000 mL/L、pH7.5、25℃、7 d;最适接种体菌龄和接种量分别为48 h和6%。对培养基海水浓度、起始pH、培养温度、培养时间进行正交试验,结果表明,菌株HT-8的培养滤液杀线虫活性达到最大的组合为海水浓度1000 mL/L,培养温度25℃,pH7.5,培养时间5 d。对菌株HT-8杀线活性物质的稳定性进行了测定,确定其活性物质具有热稳定性以及在弱碱性条件下杀线活性稳定的特点。对菌株发酵液进行杀线活性组分分析,结果表明菌株发酵液的乙酸乙酯萃取相具有很强的杀线活性,72 h的杀线活性可以达到98.2%。对乙酸乙酯相进行硅胶柱层析、凝胶色谱柱层析和制备高效液相色谱进行分离和纯化,获得两种化合物,通过质谱及核磁共振波谱将该化合物确定为Hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione和4-Methyl-5-ethylthiazole,这两种化合物在浓度为1 mg/mL时,处理松材线虫72 h线虫校正死亡率分别为77.30%和72.62%。该研究可为海洋微生物资源的开发及其杀松材线虫天然活性物质的利用提供理论依据。

摘要译文

关键词：

海洋放线菌; 鉴定; 松材线虫; 杀线活性; 杀线化合物

学位年度：

2016

学位类型：

硕士

学科专业：

微生物学

导师：

郭道森

中图分类号：

S763.18[其他+⑨]

学科分类号：

0904[植物保护];090703[森林保护学]