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大米活性肽降血压功效及吸收评价认领

被引量： 17

作者：

王申

学位授予单位：

武汉轻工大学

摘要：

本文以大米为原料，碱法提取大米蛋白，再通过碱性蛋白酶和胰蛋白酶分步酶解的方法从大米蛋白中获得大米肽（rice peptide，RP）。测定其绝对分子质量分布、氨基酸组成、肽含量、体外血管紧张素转化酶（angiotensin-I convertingenzyme，ACE）的抑制活性及抗氧化活性。以原发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensive rats，SHR）和正常对照组大鼠（wistar kyoto，WKY）为研究对象，进行大米肽一次灌胃和长期灌胃实验，以进行体内降血压机制的研究。并利用人结肠癌细胞（the human colon carcinoma cell line，简称Caco-2细胞）单层细胞模型模拟研究大米活性肽与合成三肽在人肠道的转运摄取。本研究通过酶法得到的大米肽，它的绝对分子质量主要分布范围在549～1158之间；氨基酸组成丰富，必需氨基酸含量为35.610g/100g，疏水氨基酸含量为45.200g/100g，氨基酸组成中谷氨酸含量最高，含量为16.100g/100g；大米肽的含肽量为83.84±1.44%；大米肽具有较强的抗氧化能力，清除DPPH自由基IC50为1.170mg/mL，ORAC值为1568.006μmol Trolox/g；大米肽同时也具有较高的ACE抑制活性，其IC50为0.057mg/mL。本研究体内大米肽降血压结果表明，在一次灌胃实验中，SHR中大米肽所有剂量组在灌胃后，SBP开始下降，在6h时达到最低，且下降幅度随大米肽质量浓度的增大而提高，在100mg/ml达到最大，而阳性对照（卡托普利）组降压幅度最大；SHR口服RP（100mg/kg）和卡托普利后，SBP存在显著的下降（P<0.05），但SHR口服RP（20mg/kg）后SBP下降不明显（P>0.05）；此外，WKY大鼠口服卡托普利后，SBP显著地下降（P<0.05），RP（100mg/kg）对WKY大鼠无降压作用。SHR和WKY一次灌胃的降压效果比较短暂，24小时后恢复到初始水平。长期灌胃实验结果显示，SHR灌胃RP（100mg/kg）和卡托普利6周后，SBP明显下降（P<0.05）；SHR的阳性对照组的下降幅度最高，为18.8mmHg，其次是RP（100mg/kg）剂量组17.1mmHg，RP（50mg/kg）剂量组8.2mmHg；WKY大鼠口服卡托普利6周后，SBP显著地下降（P<0.05），而RP（100mg/kg）对WKY大鼠无降压作用。本研究在大米肽降血压效果基础上，对其长期灌胃降血压机制进行了探讨。结果表明，长期灌胃6周后，SHR和WKY各组间Renin含量差异不明显（P>0.05）；与阴性对照组相比，SHR灌胃卡托普利（10mg/kg）6周后，血浆中ACE含量下降非常显著（P <0.01），而RP（100mg/kg）和RP（50mg/kg）剂量组的ACE含量也显著下降（P <0.05）；同时，SHR阳性对照组大鼠血浆中Ang II显著下降（P<0.05），RP组Ang II随着剂量的增大而逐渐降低，但是差异不明显；长期灌胃卡托普利（10mg/kg）、RP（100mg/kg）和RP（50mg/kg）后，SHR血浆中NO含量显著上升（P<0.01），ACE活力显著下降（P <0.01）；WKY灌胃卡托普利（10mg/kg）6周后，血浆中NO含量的上升非常显著（P<0.01），Ang II含量和ACE活力下降显著（P<0.05），ACE含量差异不明显；SHR和WKY不同剂量组间左心室指数的变化表明，卡托普利和RP（100mg/kg）能够显著降低大鼠收缩压，在一定程度上抑制了左心室肥厚。血浆Renin、ACE、AngⅡ、NO含量和ACE活力的测定结果表明，大米肽降压机制很可能与RAS系统和NO的调节有关。本研究通过Caco-2细胞模型，探讨大米活性肽与合成三肽在人肠道的转运摄取机制。Caco-2细胞模型建立：细胞培养21天后，细胞跨膜电阻(transepithelialelectrical resistance， TEER)为409Ω/cm2，碱性磷酸酶（bilateral alkalinephosphatase，AKP）多集中于AP侧，荧光素钠的表观渗透系数（apparentpermeability coeffcient，Papp）为1.9810-7cm/s，完全符合要求，可用于模拟小肠吸收的体外模型。VNP（Val-Asn-Pro）和大米活性肽的安全上样浓度分别为1mg/mL、2mg/mL；大米活性肽组和纯品VNP组中VNP在2.5h内随着时间增加，转运量平缓增大且近似线性增加，说明大米肽混合物中不含有抑制VNP转运的物质；同时VNP跨膜转运是浓度依赖型的。VNP的Papp为3.8810-6cm/s，属于吸收中等药物，吸收率为20%-70%。Gly-Pro和wortmannin对BL侧VNP转运无抑制作用，去氧胆酸钠对AP侧VNP转运有极其显著的促进作用。实验结果表明VNP主要以旁路转运的机制被小肠上皮细胞吸收。

摘要译文

关键词：

大米活性肽; ACE抑制活性; 降压效果; Caco-2细胞

学位年度：

2014

学位类型：

硕士

学科专业：

食品科学

导师：

宫智勇

中图分类号：

TQ464.7[氨基酸、肽、蛋白质]

学科分类号：

081702[化学工艺];083611[医药生物工程];100705[微生物与生物技术药物学]