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绵羔羊卵母细胞体外发育能力的研究认领

被引量： 3

作者：

张利

学位授予单位：

石河子大学

摘要：

羔羊体外胚胎生产技术已成为家畜繁殖领域中的研究热点之一，但由于羔羊未达到性成熟和体成熟阶段，自然条件下无法收集到卵母细胞。因此，需要在羔羊的特定阶段，采用外源激素诱导，将获得卵母细胞作为实验材料。而本文是以成年羊卵母细胞研究为基础，研究了外源激素对诱导羔羊卵泡发育的作用、亮甲酚蓝染色液（BCB）与PDE3抑制剂Milrinone在羔羊卵母细胞体外培养中的应用，旨在提高羔羊卵母细胞的体外发育能力，实验分下面四部分： 1.卵泡直径对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响以屠宰场绵羊卵巢为材料,收集不同直径卵泡中的卵母细胞，小卵泡（小于2mm）、中卵泡（2～5mm）、大卵泡（大于5mm），以研究各卵泡直径所占比例、卵泡直径对卵母细胞的回收、卵母细胞直径、GSH含量及体外发育能力的影响。结果表明，三种卵泡所占比例差异极显著（P＜0.01）；卵母细胞的回收率间无差异（P＜0.05）,但小卵泡中的卵母细胞利用率极显著低于其他两组（P＜0.01）；小卵泡卵母细胞的直径极显著低于其余两组（P＜0.01）；体外成熟培养24h后，中、大卵泡卵母细胞的成熟率和卵母细胞GSH含量均显著高于小卵泡卵母细胞（P＜0.05）；经孤雌激活体外培养后，中、大卵母细胞囊胚率极显著高于小卵泡卵母细胞（P＜0.01）。因此，卵泡大于2mm的卵母细胞适合体外培养和体外胚胎的生产。 2. BCB染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用为了探讨亮甲酚蓝(BCB)染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用，本研究将筛选后的卵母细胞进行孤雌激活，比较不同组卵母细胞的后期发育能力。结果表明,直径大于5mm卵泡中的卵母细胞阳性率极显著高于5mm以下卵泡组（P＜0.01）；卵泡直径大于5mm中BCB+组卵母细胞孤雌激活后的体外培养效率显著高于小于2mm组和2～5mm组；不同实验组卵母细胞孤雌激活后获得的囊胚总细胞数结果显示，在BCB+组卵母细胞中，卵泡直径大于2mm组高于直径小于2mm组（P＜0.01）；BCB-组各组间没有差异（P＞0.05）；未经染色的卵母细胞中，直径大于2mm组也显著高于直径小于2mm组（P＜0.05）。因此，直径大于2mm卵泡的卵母细胞用BCB染色液筛选后更适合体外培养,并且大于2mm BCB+组卵母细胞后期发育潜能更强。 3.外源激素诱导羔羊卵泡发育的研究为了优化并提高羔羊卵泡的发育效率，本实验从FSH剂量、日龄、卵泡直径、体重及品种等5个方面进行了研究。结果表明，FSH总剂量为160IU的羔羊卵泡发育效果显著高于320IU（P＜0.05），6周龄羔羊的卵泡发育效果显著高于4～5周龄、7～8周龄（P＜0.05），8～12Kg羔羊卵泡发育效果显著高于12Kg以上的（P＜0.05）。6周龄羔羊被注射等剂量FSH，萨福克和美利奴对激素的诱导效果显著高于特克赛尔（P＜0.05）。因此,用160IU FSH处理6周龄，体重在8～12Kg的萨福克羔羊，卵泡发育效果较好。 4. BCB染色液与Milrinone在羔羊卵母细胞体外培养中的应用研究为了提高羔羊体外胚胎生产效率，研究了BCB染色液对羔羊卵母细胞的筛选作用及milrinone对BCB-组卵母细胞的影响。结果表明，13μM BCB+组卵母细胞的体外培养效率与26μM组无显著差异（P＞0.05）。筛选后的BCB+组卵母细胞直径和GSH含量显著高于BCB-（P＜0.05），而二者都与成年羊差异不显著（P＞0.05）。BCB-卵母细胞经milrinone抑制6h后，体外胚胎发育率显著高于BCB-组和对照组，而与成年羊无显著差异（P＞0.05）。因此，BCB染色液与milrinone相结合，可以提高羔羊卵母细胞的体外培养效率。

摘要译文

关键词：

BCB; 激素诱导; milrinone; 绵羔羊; 体外培养

学位年度：

2014

学位类型：

硕士

学科专业：

动物遗传育种与繁殖

导师：

黄俊成

中图分类号：

S826[羊⑨]

学科分类号：

0905[畜牧学]

D O I：

10.7666/d.D570956