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一种含RGD小肽RWR的设计、合成及功能初探认领

被引量： 1

作者：

赵海霞

学位授予单位：

山西医科大学

摘要：

目的： 1、设计一种新型的小肽RWR。 2、观测RWR对血小板聚集及血栓形成的影响。 3、探索RWR通过αIIbβ3抑制血栓形成的机理。 4、验证RWR的抗栓效果，为含RGD抗栓药物的研发提供理论依据。方法： 1、RWR小肽的设计与合成利用Fmoc固相法合成化学方法合成RWR，在RGD基础上，增加一个疏水性氨基酸和一个碱性氨基酸，序列特征为Arg-Gly-Asp-Trp-Arg，蛋白质一级结构为RGDWR，课题组将这种新的化合物命名为RWR，该小肽具有RGD结构，理论上具备通过血小板表面整合素αIIbβ3受体从而与血小板特异结合的能力。 2、RWR对血小板聚集的影响的体外量效关系利用血小板聚集仪检测不同浓度RWR对血小板最大聚集率的影响。将家兔全血分离为PRP和PPP，用PPP校零后，在PRP管中加入相同剂量的血小板聚集诱导剂ADPNa2，再加入不同浓度的RWR，检测5min内的血小板最大聚集率。用同样的方法检测RWR对人血小板聚集率的影响。 3、RWR与替罗非班（tirofiban）、阿司匹林（aspirin）等传统药物相比较，作用于家兔血小板聚集率分别用不同浓度的替罗非班和阿司匹林作用于体外分离出的血小板，计算出两者的半数有效抑制浓度（IC50），与我们合成的RWR药物的IC50相比较，观察RWR的作用强弱。 4、RWR对血小板聚集率影响的体内时效关系给药前心脏取血测量血小板聚最大集率，将RWR耳缘静脉注射后，0h,0.25h,0.75h,1h,2h分别心脏取血，分别测量血小板最大聚集率。观察RWR在体内的代谢时长以及其作用时效。 5、RWR对血栓形成的影响利用家兔动静脉血栓旁路循环模型和大鼠三氯化铁血栓模型研究RWR对血栓形成的影响。两种模型分别通过血栓重量和血栓内部结构变化分析RWR的作用效果。 6、RWR对血液中cGMP含量的影响通过酶联免疫试剂盒来测定血液中cGMP的含量，了解血栓的变化，反映RWR的作用效果。结果： 1、质谱分析证实RWR序列正确，高效液相色谱提示RWR的纯度97.06%。 2、血小板聚集实验显示随着RWR的浓度增大，血小板最大聚集率逐渐降低。RWR较阿司匹林、替罗非班抗血小板聚集活性强。且与家兔血小板相比较，RWR对人血小板聚集率作用效果更显著。 3、兔子动静脉旁路循环实验表明，随着RWR浓度的增大，血栓重量逐渐减小且其作用较替罗非班强。大鼠三氯化铁血栓模型显示随着RWR的浓度增大，血管内的腔隙变小。 4、随着给药浓度RWR的上升，血浆中cGMP的含量逐渐增大。结论： 1、合成全新小肽RWR，结构与设计相符。 2、血小板聚集实验证实RWR在体内外均具有明显抑制血小板聚集的特性，且与传统抗栓药物阿司匹林和替罗非班相比，RWR抗血小板聚集效果更强。 3、两种血栓模型实验证实RWR可以抑制血栓形成,且其对血栓重量的影响较替罗非班强，血浆中cGMP含量增大，验证了RWR抗血栓的效果。

摘要译文

关键词：

RGD; 小肽; 合成; 血栓; cGMP

学位年度：

2013

学位类型：

硕士

学科专业：

生物化学与分子生物学

导师：

杨涛

中图分类号：

R3411;R3[基础医学]

学科分类号：

1001[基础医学];100601[中西医结合基础医学]

D O I：

10.7666/d.D330959