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两株耐碱放线菌的次生代谢产物研究认领

被引量： 4

作者：

王智颖

学位授予单位：

中国海洋大学

摘要：

嗜碱菌是极端微生物中的一类，长期应对恶劣的生存环境，其必定会拥有独特的生理功能和代谢途径，产生普通微生物所不能产生的活性物质。但是目前对嗜碱菌和耐碱菌次生代谢产物的研究却鲜有报道。为了寻找结构新颖的活性化合物，本论文采用化学和活性相结合的集成筛选法，开展了对耐碱放线菌次生代谢产物的研究工作。内容包括：海洋放线菌和真菌的分离，耐碱放线菌的筛选及初步评价，天才菌株的获得及碱调节对其次生代谢产物的影响，活性成分的分离纯化，单体化合物的结构解析，单体化合物活性的初步评价。从青岛深层土壤样品和海南植物样品中分离得到了42株微生物。采用SRB和MTT法，以小鼠白血病细胞P388、宫颈癌细胞Hela、人白血病细胞HL-60为筛选模型对分离得到的菌株和沙漠菌株进行细胞毒活性的筛选，然后用平板打孔法，进行抑菌活性的筛选，再结合HPLC指纹图谱及薄层色谱进行化学筛选，得到2株“天才菌株”—YIM80379和MBRL-204，并对其进行深入研究。YIM80379进鉴定为拟诺卡氏菌Nocardiopisis alkaliphila sp. nov.，MBRL-204为链霉菌Streptomyces sindenensis。在考察了不同条件碱胁迫对这两株菌的次生代谢的影响后，对其分别进行了大规模发酵，对发酵产物运用了萃取，薄层层析，正相、反相硅胶柱层析，LH-20凝胶柱层析，反相高压液相等多种化学的分离纯化手段，从Nocardiopisisalkaliphila sp. nov. YIM80379的次生代谢产物中分离得到6个单体化合物（1-6），从Streptomyces sindenensis MBRL-204的次生代谢产物中分离得到17个单体化合物（7-23）。继而，利用理化性质和波谱学方法（IR, UV, MS, NMR等）结合化学反应阐述了23个化合物的化学结构（化合物结构及名称参见Table1），其中3个为新化合物。所得化合物的结构类型包括：2-吡喃酮类（1，2）、吩嗪类（7，8）、二酮哌嗪类（17-21）、喹啉酮类（9-16）、其他类（3-6，22，23）。利用SRB法、MTT法对化合物进行了细胞毒活性测试，化合物7和8对A549细胞有中等程度抑制活性。用Kirby-Bauer纸片扩散法对部分单体化合物的抗菌活性进行了初步评价，结果表明：化合物1、2、7─16和23分别对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、铜绿假单孢菌、产气杆菌以及白色念珠菌表现出不同程度的抑制作用。综上，本文对两株耐碱放线菌的次生代谢产物进行了系统研究，共分离鉴定了23个化合物，包括2个新的2-吡喃酮和1个新的含硫化合物；并且筛选获得了一株高产吩嗪生物碱的放线菌。这些研究表明，放线菌有很大的研究潜力。而且pH值对次生代谢产物的影响明显，说明通过碱调节可以诱导微生物产生不同的活性次生代谢产物。

摘要译文

关键词：

耐碱放线菌; 次生代谢产物; 抗菌活性; 细胞毒活性

学位年度：

2012

学位类型：

硕士

学科专业：

药物化学

导师：

朱伟明

中图分类号：

R284[中药化学]

学科分类号：

1005[中医学];100801[中药资源学];100804[中药化学]

D O I：

10.7666/d.y2212557